Biochrom30+氨基酸分析仪氧化水解法检测鱼粉A中氨基酸，样品前处理所用试剂：必须使用重蒸馏水或与之等质的水（电导率＜10μs）

一、样品前处理
1、 所用试剂 必须使用重蒸馏水或与之等质的水（电导率＜10μs）
1、1 双氧水,30%
1、2 甲酸，98-100%
1、3 苯酚：须重蒸
1、4 偏重亚硫酸钠
1、5 氢氧化钠
1、6 盐酸，ρ＝1.18g/ml
1、7 水解剂：6mol/l 的 HCL，1L 含 1g 苯酚： 加 1g 苯酚（3.3）到 492mL 盐酸(3.7)中，然后用水定容至 1L
1、8 20 种氨基酸标准品


2、 标样配置
氨基酸混合标准储备液：称取上述各氨基酸标样使用 PH2.2 的 Load Buffer 配置成 2.5umol/L 的储备液备用。 取氨基酸混合标准储备液与 PH2.2 的 Load Buffer 以 1:9 的比例配置成 0.25umol/L 的 标准液。

3、 前处理设备
1) 天平
2) 水解管
3) 量筒
4) 无油真空泵
5) 干浴水解、浓缩仪
6) 移液管
7) 0.45um 滤膜

4、 样品制备（参考欧盟饲料指令 98/64/EC ）
1、 样品的准备 粉碎样品，通过 0.5mm 的筛孔。高水分的样品粉碎前必须低于 50℃鼓风干 燥或者冷冻干燥。高脂肪含量的样品粉碎前必须用轻质石油（3.12）脱脂。
2、 氧化 从准备好的样品中称取约 0.1~1 克样品，准确到 0.2mg，于 100 ml 带螺纹盖 子的瓶子中，称取的样品应该含有大约 10mg 氮，水分不能超过 100mg。将瓶子 放于冰水浴中冷却至 0℃，加 5ml 氧化试剂（过甲酸苯酚），用带弯头的玻璃刮勺 混合。用空气密封膜将瓶子和刮勺一起密封，密封后一起放入 0℃冰箱的冰水浴 中，放置 16 小时。之后，从冰箱中取出，加 0.84 克偏重亚硫酸钠（3.4）来分解 过量的氧化试剂。
3、 水解 加入 25 毫升盐酸-苯酚溶液, 然后将反应瓶放在烘箱中，温度控制在 110 摄 氏度，旋松帽子（防止玻璃瓶子破裂），水解 1 小时。然后快速旋紧瓶塞（戴手套 和护眼罩）将其继续在烘箱 110 摄氏度下水解 23 小时。
4、 加入内标并且调节 pH 值到 2.20 当水解反应结束后，将反应瓶从烘箱中取出，并且打开瓶口（戴手套和 护目镜）。冷却后用定量加样器准确加入 15.00 克(15 毫升)正亮氨酸标准溶液，混 合并且转移水解溶液到 250 毫升的塑料烧杯中。加入大约 125 毫升柠檬酸缓冲液 和 19 毫升氢氧化钠水溶液,将实验烧杯放入到样品容器中用氢氧化钠水溶液将溶 液调节到 pH 为正好 2.20。 转移一部分溶液（不需要全部）到 50 毫升有盖子的塑料瓶中。可以马上测定 或者放入冰箱等到分析的时候测定。

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