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技术资料/正文
高效犬血免疫球蛋白的分离纯化工艺
53 人阅读发布时间:2022-02-07 16:00
IgG是免疫球蛋白G的缩写,IgG是人和动物血清最主要的抗体成分。IgG的功能、作用主要在机体免疫中起保护作用,大多数抗菌、抗病毒产生的抗体类型,多数为IgG型抗体,例如对麻疹、甲型肝炎等的抗体,能有效预防相应的感染性疾病。
犬类从古至今,一直是人类最广泛饲养的宠物和助手。随着人类生活水平的提高,人们养宠物犬越来越多,甚至在农村犬除了作为助手以外,人们也越来越倾向于宠物饲养。但人类对于犬相关性疾病的认识还非常不足,犬IgG是体液免疫的重要抗体,其反应犬个体的免疫水平和某些疾病的感染情况,犬血IgG与人血清IgG类似,也可以用来治疗某些疾病。
动物血清中抗体的分离纯化,除了Protein A亲和介质具有良好的纯化效果外,多肽配基亲和介质具有配基分子量小、稳定性高、成本低的优势,具有重要的应用前景。针对动物血清中抗体的纯化需求,中科森辉基于中国院过程工程研究所筛选的多肽亲和配基,制备了高载量、高特异性的多肽配基亲和介质(SH-7D 亲和层析介质)。
具体工艺
1.原料预处理
离心:血清离心,取上层清液;脱脂:离心后上清脱脂;调pH:脱脂后上清用纯水稀释,使用1N盐酸调节pH;离心:样品再次离心,取上清液备用
2.纯化工艺
Buffer A:20 mM PB;Buffer B:20 mM PB +0.5M NaCl;介质:SH-7D亲和层析介质
层析:先用Buffer A平衡层析柱;然后上样。上样结束后用Buffer A 淋洗紫外至基线。最后用Buffer B进行洗脱得到高纯度的犬IgG。
3.检测
HPSEC检测:分析柱TSK gel G3000 SWxl(300x7.8 mm I.D.)IgG单体+二聚体大于93%。(药典2020通则3122)
SDS-PAGE电泳法:(药典2020:通则0541)纯度大于95%。
项目已达中试阶段