您还在为如何得到抗体亚基 F(ab')2 和 Fc/2 而发愁么？您还在使用木瓜蛋白酶，胃蛋白酶的方法来切割 IgG 抗体么？使用传统的 IgG 酶切方法需要不断反复的摸索酶切条件，同时酶切时间过长， 位点切割特异性差，酶切过度或者酶切不完全的情况也着实让实验者烦忧，想想都心累，今天小编要为大家介绍一款新的产品，来自瑞典 Genovis 公司的 FabRICATOR 蛋白酶。



FabRICATOR^® (IdeS) 是一种独特的半胱氨酸蛋白酶，在铰链区下方的一个单一氨基酸位点酶切 IgG，可对多种来源的 IgG 进行酶切（人源，鼠源，兔，猴，绵羊、嵌合 IgG、Fc 融合蛋白等），特点是：高特异性单一酶切位点，30 分钟快速酶切，操作简单快捷。

FabRICATOR 的优势比较

FabRICATOR 蛋白酶有更高的特异性和 IgG 选择性，反应条件简单可兼容多种不同 pH 值的缓冲液，并且能明显缩短反应时长。



FabRICATOR 酶切效果

IgG 抗体经过 FabRICATOR 酶切后，添加还原剂，可将 IgG 还原成三部分 Fd'， LC ，Fc/2。质谱图显示 FabRICATOR 将 IgG 抗体完全酶切。



FabRICATOR 应用

FabRICATOR 酶切后可产生精确的抗体亚基结构域。可分析亚基的赖氨酸剪切程度，确定亚基的氧化水平。可用于生物仿制药、单克隆抗体、抗体偶联药物、Fc 融合蛋白等领域，在克隆选择、生产监控、质量控制、稳定性测试等环节发挥重要作用。

2018 年 10 月 Genovi 公司推出新产品 FabRICATOR^®-HPLC ，将 FabRICATOR 酶直接固定在高效液相色谱柱上，实现了单克隆抗体亚单位的柱上酶切，FabRICATOR-HPLC 柱在铰链下方快速且特异地消化 IgG，产生 F(ab』)2 和 Fc 片段，不存在过度消化的风险。FabRICATOR-HPLC 柱被设计成用于中级工作流程中快速柱上消化的分析工具，用于抗体和 Fc-融合蛋白的表征鉴定。消化后可以使用反相 HPLC、质谱或其他分析方法分析产物。抗体消化和亚基生成的自动化使得能够应用于生物反应器的在线监测，例如作为 2D-LC-MS 装置的一部分，将反应器直接与质谱仪联用。
 

柱规格：2.1 mm*50 mm 填料：POROS™ 流速：0.025-0.05 mL/min 耐压：100 bar 反应条件：37°C   pH: 6.5 - 8.0 存储温度：4°-8°C 反应物：Human IgG1-4 和 FC 融合蛋白等 表现：37°C 条件下，pH 7.4 的 PBS 中，对 10 µg human IgG1 切割效率>95%，可上样>200 次。该柱在 37℃ 下连续消化 14 天，在试验期间注射了 450 多次单克隆抗体，没有观察到残留。并可获得可重复的 FC 聚糖图谱分析。

图 2. FabRICATOR-HPLC 柱与生物反应器和质谱仪联用

图 3：FabRICATOR-HPLC 切割效率展示 a）柱上酶切和溶液酶切效果对比。 b）连续上样 14 天 IgG 切割效率图。

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