PSCeasy人多潜能干细胞（ES/iPS）培养基

2014-04-17

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一、PSCeasy^TM培养基的优势：

二、PSCeasy^TM培养基的特性：

PSCeasy^TM人多潜能干细胞（ES/iPS）培养基是Cellapy^TM公司根据多年的干细胞培养经验并结合相关的文献资料，成功开发出的一种适用于无饲养层、并且化学成分明确的人ES/iPS细胞完全培养基。

PSCeasy^TM人多潜能干细胞（ES/iPS）培养基与传统培养基的比较

图一：在采用人工合成Vitronectin或商品化Matrigel底物的无饲养层细胞培养条件下，以PSCeasy^TM培养基进行扩增的hiPS细胞呈克隆集落样生长。与有饲养层培养相比，hiPS细胞的形态更加均一，细胞生长更加旺盛。在高倍镜下（400X）,大多数hiPS细胞呈现出较大的核质比（细胞核/细胞质），说明hiPS细胞处于细胞周期中并且在持续分裂；所有的克隆AP染色阳性。

图二：我们对PSCeasy^TM培养基的对细胞增殖的作用做了测定，并且绘制生长曲线。结果显示，所有的多潜能干细胞都在PSCeasy^TM培养基条件下快速的增殖，倍增时间从32到36小时不等。

图三：以PSCeasy^TM培养基进行扩增对干细胞进行长期传代培养后（10次传代），采用针对多潜能干细胞特异转录因子OCT4、SOX2和NANOG，和特异表面标志物TRA1-60、TRA1-81和SSEA4的一抗抗体，并采用红色和绿色荧光素（Alexa488和Alexa592）偶联的二抗进行免疫荧光染色，以及采用DAPI对细胞核进行复染。结果显示，A：hiPS细胞的细胞核中可见OCT4蛋白表达（红色并且于蓝色的细胞核重合），细胞膜则表达TRA1-81；B：hiPS细胞的细胞核中可见SOX2蛋白表达（红色并且于蓝色的细胞核重合），细胞膜则表达SSEA4；C：hiPS细胞的细胞核中可见NANOG蛋白表达（红色并且于蓝色的细胞核重合），细胞膜则表达TRA1-60。

图四：经过以PSCeasy^TM培养基长期传代培养的hES细胞和hiPS细胞的基因表达谱聚类在一起，而与成纤维细胞（hFibroblast）差异较大（A）。同时，散点分布图数据的比较，也可以得出相同的结论（B，C）。

图五：经过PSCeasy^TM培养基长期传代培养的hiPS细胞维持了其在体外分化为三个胚层细胞的潜能。通过体外拟胚体形成实验，hiPS细胞可以分化成1）神经外胚层细胞，如TUJ1阳性的神经元细胞，GFAP阳性的胶质细胞；2）内胚层细胞，如PDX1阳性的胰腺细胞，AFP阳性的肝细胞；3）中胚层细胞，如SMA和DESMIN阳性的肌肉细胞。

图六：将hiPS细胞移植到免疫缺陷小鼠的肾包膜中，经过4-6周后可以形成具有不同胚层组织的畸胎瘤。将肿瘤组织做组织学鉴定后可发现上皮样的腺体组织，骨骼肌组织，骨组织和神经组织。说明经过PSCeasy^TM培养基扩增的多潜能干细胞维持了良好的体内分化潜能。'>1）神经外胚层细胞，如TUJ1阳性的神经元细胞，GFAP阳性的胶质细胞；2）内胚层细胞，如PDX1阳性的胰腺细胞，AFP阳性的肝细胞；3）中胚层细胞，如SMA和DESMIN阳性的肌肉细胞。