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蛋白质非标记定量技术(Label-Free shotgun)

   2015-03-17
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定量蛋白质组学(Quantitative Proteomics)是对一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂混合体系内所有蛋白质进行精确鉴定和定量。可用于筛选和寻找任何因素引起的样本之间的差异表达蛋白,结合生物信息学揭示细胞生理病理功能,同时也可对某些关键蛋白进行定性和定量分析。随着蛋白质组学研究的不断深入,对于复杂生命现象的研究必然要求蛋白质组学能够揭示蛋白质的动态变化。这其中就包括了蛋白质在不同状态、环境和处理等情况下表达量的变化,而质谱技术的飞速发展为定量蛋白质组学的研究提供了技术保障。


Label-free shotgun:无标签标记的定量蛋白质组学研究,依赖于繁杂的信息分析完成定量过程,主要有两种:信号强度和谱图计数法[1]。前者根据一级质谱相关的肽段峰强度(Mass spectral peak intensity)、峰面积(Peak area)、液相色谱保留时间(LC retention time)等信息进行定量分析;后者根据二级质谱相关的每个蛋白鉴定到的肽段总次数(Peptide hide或Spectral counts)、所鉴定肽段的离子价位(Ion counts of identified peptides)等信息进行定量分析。

技术特点

无标记:克服标记样本的局限性,可研究大规模样本

数据要求高:基于高实验重复性,得到准确结果

定量方法:基于信息分析进行差异蛋白定量

数据量大:信息分析要求高

信息分析内容

数据产出统计

蛋白质Pathway代谢通路分析

蛋白质鉴定结果

差异蛋白GO富集分析

蛋白质定量结

差异蛋白的Pathway富集分析

蛋白质GO分析

重复性分析(仅针对有重复设计的项目)


技术流程

蛋白2.png

样本要求


新鲜动物组织

植物

微生物

细胞

血液

唾液、羊水、脑脊液等体液

尿液

蛋白

干重≥100mg

湿重≥5g

≥200mg

≥3-5×106,细胞沉淀体积约30-50µl

血清/血浆≥500µl,全血≥2ml

≥2ml

≥50ml

≥500µg,浓度≥1µg/µl


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编辑: weicf    来源:丁香园

北京毅新博创生物科技有限公司成立于2008年,由国家“千人计划”张教授领军,组建了包括多名海归博士的科研团队。毅新博创为国家火炬高新技术企业、北京市高新技术企业和北京科技研究开发机构。2013年8月,毅新博创和中国人民解放军总医院、美国约翰霍普金斯大学、美国斯坦福大学合作成立“北京市临床质谱国际科技合作基地”,并于2014年6月被挂牌为中关村开放实验室“生物质谱转化医学研究中心”。

 

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