WB 实验技术指南

WB（Western Blot）即蛋白印迹法，其原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。

实验流程

蛋白免疫印迹一般由样本处理、凝胶电泳、样品的印迹和免疫学检测组成，见图 1。

图 1

1）样本处理：样本经过处理后，使样本中的蛋白能够解离出来，用于后续的检测；

2）SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳：使待测样品中的蛋白质按分子量大小在凝胶中分成带；

3）转膜：把凝胶中已分成条带的蛋白质转移到一种固相支持物上，用得最多的材料是硝酸纤维素膜(NC 膜)(RM00017) 和聚偏二氟乙烯膜（PVDF 膜）(RM00018)，蛋白转移的方法多用电泳转移（转移电泳），它又有半干法和湿法之分； 

4）免疫学检测：用特异性的抗体检测出已经印迹在膜上的所要研究的相应抗原。免疫检测方法可以是直接的和间接的。现在多用间接免疫酶标的方法，在用特异性的第一抗体杂交结合后，再用酶标的第二抗体（碱性磷酸酶（AP）或辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗第一抗体的抗体）杂交结合，再加酶的底物显色（RM00020，RM00021）或者通过膜上的颜色或 X 光底片上曝光的条带来显示抗原的存在。

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编辑： zhuq    来源：丁香园