转染试剂

HighGene 简介

HighGene 转染试剂是一种新型高效的阳离子聚合物。它可以与核酸（包括质粒、siRNA、寡聚核苷酸）相互作用形成一种复合物将核酸转运到真核细胞内，适用于大部分真核细胞的细胞转染。

HighGene 优势

（1）  转染效率较高，ABclonal 选取多种常见细胞系（包括 HEK293T、HCT116、HeLa、A549、C6、HEK293F 等），分别使用 HighGene 转染试剂和市面常规转染试剂产品进行细胞转染，实验结果如图 1 所示。

图 1：HighGene 转染试剂具有较高的转染效率。在 6 孔细胞板中分别接种 293T、HCT116、C6 三种细胞，细胞密度为 60% 左右，分别使用 HighGene 转染试剂和两种市面同类产品进行细胞转染，GFP 真核表达质粒用量均为 2 μg，细胞转染 48 小时后，在荧光显微镜下观察并拍照。

（2）  性质稳定，实验重复性好，ABclonal 选取 HeLa 细胞系，分别铺置三个复孔，使用 HighGene 转染试剂进行细胞转染，实验结果如图 2 所示。

图 2：HighGene 转染试剂实验重复性高度一致。在 6 孔细胞板中接种 HeLa 细胞，细胞密度为 60% 左右，使用 HighGene 转染试剂进行细胞转染，GFP 真核表达质粒用量为 2 μg，细胞转染 48 小时后，在荧光显微镜下观察并拍照。

（3）  对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用，HighGene 转染试剂除了适用于贴壁细胞外，对于悬浮细胞也有较好的转染效果。ABclonal 选取 293F 悬浮细胞系进行了测试，实验结果如图 3 所示。

图 3：HighGene 转染试剂适用于 HEK293F 悬浮细胞的转染。在 125 mL 摇瓶中接种 30 mL 密度为 1 x10⁶ HEK293F 悬浮细胞，使用 HighGene 转染试剂进行细胞转染，GFP 真核表达质粒用量为 30 μg，细胞转染 48 小时后，在荧光显微镜下观察并拍照。

（4）  无明显细胞毒性，细胞转染后，48 小时内无需更换细胞培养液。ABclonal 选取 293T 细胞进行细胞转染后，不更换细胞培养液，连续培养两天，并拍照记录细胞生长状态及转染效果，实验结果如图 4 所示。

图 4：HighGene 转染试剂对细胞无明显毒性。在 6 孔细胞板中接种 293T 细胞，细胞密度为 60% 左右，使用 HighGene 转染试剂进行细胞转染，GFP 真核表达质粒用量为 2 μg，细胞转染 24、48、72 小时后，在荧光显微镜下观察并拍照。

储存条件

2-8℃ 储存，保质期两年，避免反复冻融。

HighGene 使用说明

• 贴壁细胞转染（以 HEK293T 细胞为例）

1.  第一天，将 HEK293T 细胞接种到 24 孔板中，细胞密度控制在 50%-70% 为宜；
（注：根据实验需求，可以选择不同的细胞培养装置，细胞接种数量和所需培养液体积详见附表 1）

2.  第二天，取 1 μg 质粒加入到盛有 50μL 无血清 DMEM 基础培养基离心管中，标记为 A 液；取 2μL HighGene 转染试剂加入到另一个盛有 50μL 无血清 DMEM 基础培养基离心管中，标记为 B 液；
（注： MEM、1640、F12 等基础培养基均可用于 HighGene 转染试剂的溶剂，不同的细胞培养装置所需质粒的量和 HighGene 转染试剂剂量详见附表 2）

3.  将 50μL 含有 HighGene 转染试剂 B 液滴加到 50μL 含有质粒 A 液中，用移液枪轻轻吹打几次混匀，室温静置 15-20 分钟；

4.  将 100μL HighGene 转染试剂/质粒复合物均匀滴加到 24 孔细胞培养板孔中，轻轻摇动细胞培养板使其均匀分布；

5.  细胞转染 4-6 小时后，更换新鲜完全培养基（可选！）；

6.  细胞转染 24-48 小时后，即可使用适当方式进行检测，如 RT-PCR、Western、ELISA、报告基因等，或加入相应筛选药物（G418 或 Puromycin）获得稳定细胞株。

• 悬浮细胞转染（以 HEK293F 细胞为例）

1.  第一天，将 HEK293F 细胞接种 30 mL 细胞悬液到 125 mL 摇瓶中，细胞密度控制在（1.0-1.5）×10⁶ 为宜；

2.  第二天，取 30 μg 质粒加入到盛有 1.5 mL DMEM 基础培养基离心管中，标记为 A 液；取 60μL HighGene 转染试剂加入到另一个盛有 1.5 mL DMEM 基础培养基离心管中，标记为 B 液；

3.  将 1.5 mL 含有 HighGene 转染试剂 B 液滴加到 1.5 mL 含有质粒 A 溶中，用移液枪轻轻吹打几次混匀，室温静置 15-20 分钟；

4.  将 3 mL HighGene 转染试剂/质粒复合物均匀滴加到盛有 30 mL HEK293F 悬浮细胞的 125 mL 摇瓶中，轻轻摇动摇瓶使其混合均匀；

5.  细胞转染 5 天后，根据蛋白表达的情况（胞内表达或分泌表达），收集细胞或细胞培养上清，进行后续蛋白纯化操作。

注意事项

1.  转染前细胞应处于良好的生长状态（对数生长期为佳），推荐细胞传代后 12-24 小时内、细胞密度为 60-70% 时进行转染；

2.  使用高质量的质粒有利于获得较高的转染效率，推荐使用无内毒素质粒抽提试剂盒抽提质粒；

3.  在配制转染试剂与质粒复合物时，需使用无血清、无抗生素的基础培养基作为溶剂；

4.  在细胞转染实验中，根据细胞转染效率可适当调整质粒与转染试剂的用量比例，一般质粒的量（μg）与 HighGene 转染试剂剂量（μL）使用比例在 1:1-1:4 之间，推荐比例为 1:2；

5.  本产品仅限用于科学研究，不得用于临床诊断和治疗。

* 附表 1 常用细胞培养装置转染前一天细胞接种的推荐数量和培养体积

* 附表 2 常用细胞培养装置细胞转染时，各组分推荐使用剂量

* 附表 3 常用细胞培养装置细胞转染时，siRNA 各组分推荐使用剂量               

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编辑： zhuq    来源：丁香园