坑爹啊，一个载体构建，花了我四个月时间，往事不堪回首，为了各位兄弟姐妹们避免重蹈我的覆辙，我就一把鼻涕一把泪的给大家倾诉一下。构建之前啊，我就翻丁香园啊，把里面关于载体构建的精华看了一遍啊，然后呢，以为构建载体很简单啊，以为一个月能搞定啊，所以满心欢喜的就开工了啊。实验室没有载体，就跟别人借。载体借到了，按照文献里报道的选了两个酶切位点，离的太近，先单酶切验证，一切正常。接着往地下做，为了省时间，选用PCR产物直接双酶 ...

 产品技术背景pRI系列载体是基于III类RNA聚合酶启动子：人类H1启动子的专用于哺乳动物细胞RNA干扰的载体。H1启动子在哺乳动物细胞内合成类似siRNA分子的小分子RNA。由于H1启动子有精确的转录起始位点和终止信号，H1启动子转录产物精确生成人工设计的shRNA，shRNA经过RISC剪切后形成有2个U突出末端的成熟siRNA。由于H1启动子对转录产物长度的严格限制，基本上杜绝了非特异性干 ...

我以前做过比较多的载体构建，从来没遇到困难，因此想当然的认为这是太简单的事情，最近克隆一个基因就遇到了很多问题，花了1个月时间才成功，所以把我的经验和大家分享一下：我的目的基因是5kb左右的，因此刚开始用的是Takara的普通的premix exTaq，后来看说明说这个酶可以扩增3.7kb的产物，但Takara的网站上又说可以扩增10kb长度的产物，刚开始一直未成功，从PCR阶段就出问题了，没有目的片段，只有2kb ...

近年来的研究表明一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达诱使细胞表现出特定基因缺失的表型 称为RNA干扰（RNA interferenceRNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是这种短片断双链RNA分子能够以序列同源互补的mRNA为靶目标降解特定的mRNA.RNAi的发现具有划时代的意义它不仅深入揭示 了细胞内基 ...

sahalafeisha 我要做心血管方面的实验，想要构建microRNA过表达和反义核酸病毒载体，请问用腺病毒还是慢病毒，二者之间有什么区别。谢放各位高手！song333 most people use lentivirus,lenti is RNA virus, can integrate into host genome for long term assay; can infect into nondividing cells; high efficiency; easy to make virus.zhuj ...

大家是否在实验中经常遇到载体构建的各种问题，浪费大量的时间和精力，各种各样的问题让人头疼，海创科业小编作为科研老司机特意为各位科研君整理了载体构建实验常见问题及解决方法，希望能够帮助到大家。1. PCR载体构建大部分时候都要通过PCR的方法获取目的片段，扩增PCR的时候大家尽量选用高保真的PCR酶来进行扩增，扩增之前我们首先要了解目的基因序列信息。其次高质量的模板对PCR成功与否也很重要，以质粒作为模板的PCR ...