病毒载体构建、选择及应用案例解析

病毒载体由于其宿主范围广,作用时间长在基础科研中应用越来越广泛,慢病毒宿主范围广,基因容量大,感染效率高,能整合基因到宿主细胞,实现长期稳定表达,常构建稳定株。腺相关病毒免疫原性低,多种血清型,体内扩散能力强,常用用于体内研究。腺病毒携带外源基因片段大,携带外源基因片段大,感染效率高,主要用于体外难感染的细胞。 腺相关病毒、腺病毒、慢病毒、逆转录病毒因不同的感染特性,在神经、肿瘤、代谢等领域具有不同的应用场景。本专题涉及病毒载体构建及注意事项,不同调控方式的比较和选择,不同病毒载体在各研究领域详细实用案例解析,梳理不得不知的硬核知识点,让您从小白进阶成高手!

实验资料

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常用载体元件介绍及病毒载体应用

1.常用载体分类:2,常用载体元件介绍:(1) 启动子:启动子是位于结构基因5'端上游的DNA序列,能活化RNA聚合酶,使之与模板DNA准确的结合并具有转录起始的特异性。启动子主要分为广谱启动子和特异性启动子。广谱启动子为在各种组织、细胞上广泛表达的启动子;特异性启动子为在特异性组织或者细胞类型上表达的启动子。常用广谱启动子有CAG,CMV,EF1a,PGK等,还包含启动RNA的III型启动子U6和H1启动子;常用特异性 ...
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AAV 和 LV 载体在神经系统中的应用

病毒是由核酸分子(RNA 或 DNA)和 / 或蛋白质组成的非细胞形态,这是一种无法独立生长的生命体,其复制过程必须通过感染宿主细胞,将遗传物质导入宿主细胞,并依靠宿主细胞进行复制,组装成病毒颗粒。对病毒的研究可以分为「抗病毒」和「利用病毒」两种思路,而病毒载体正是「利用病毒」的思路。二十世纪七十年代,分子生物学家 Paul Berg 利用病毒的这一特性,改造 SV40 病毒感染猴子肾脏的培养细胞,做成第一个病毒载体。后来,科学家们开始从利用自然界中存 ...
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慢病毒载体基础知识及应用

1.慢病毒载体概述慢病毒载体(Lentivirus)是一类改造自人免疫缺陷病毒(HIV)的病毒载体,是逆转录病毒的一种,基因组是RNA,其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代,属于假型病毒。可利用逆转录酶将外源基因整合到基因组中实现稳定表达,具有感染分裂期与非分裂期细胞的特性。慢病毒基因组进入细胞后,在细胞浆中反转录为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录 ...
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基于病毒载体的不同基因调控方式的原理和选择

1.病毒载体可以进行哪些方面的基因操作?基因功能研究主要涉及功能获得和功能缺失,功能获得主要包括外源的过表达,内源性激活,功能缺失主要包括基因干扰和敲除等。借助病毒载体可以进行基因过表达、干扰、敲除和内源性激活等操作,其中基因包括编码基因和非编码基因。2 .不同基因调控方式的原理外源过表达:基因功能研究中通常需要上调目的基因的表达来观察表型的变化。过表达是将目的基因在宿主细胞大量表达的过程,其基本原理是将目的基因 ...
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妙用病毒载体开展环路示踪工作

神经元之间的环路连接非常复杂,完整而准确地显示这些环路的结构和变化,对揭示许多疾病的病因和新治疗方法的开发具有非常重要的意义。传统的神经示踪方法如电镜、Golgi染色、染料、肽类标记物等可以显示神经元的形态和投射,少数示踪剂如WGA、TTC等还可以实现跨突触标记,但这些方法都具有信号间接、方向不特异、跨突触后信号衰减严重等缺点,最重要的是,这些染料无法携带基因,因此只能显色。自20世纪80年代,Kristenss ...
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钙成像、电压成像及神经递质探针原理介绍

成像技术(Imaging)一、钙离子成像技术(Calcium imaging)钙离子成像技术(Calcium imaging)是指利用钙离子指示剂监测组织内钙离子浓度的方法。在神经系统研究中,我们常用钙离子成像技术监测神经元内钙离子的变化,提示神经元活动。有了钙成像技术,原本悄无声息的电生理活动就变成了一幅形象地、斑斓闪烁的壮观影像,研究人员可以同时大量追踪神经元活动,研究其关系,因而被全世界神经科学家们追捧。1)钙离子成 ...
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