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讲师介绍

方文静
北纳生物菌种技术专员,负责菌株的培养基、活化与传代、菌株的保藏、污染和菌株推荐,为收到菌株之后的处理以及培养等操作。

视频介绍

所谓细胞虐我千百遍,我待细胞如初恋。细胞培养过程中,总是会出现各种意想不到的问题,一不留神就会全盘皆输。
对于实验操作不太熟悉的朋友,与其一边做着科研一边拜着上帝祈祷实验成功,不如看看北纳生物技术老师如何操作。
今天要学习的是贴壁细胞的保藏方法,大家赶紧拿出小本本认真听讲吧!

操作步骤
一、观察细胞状态
贴壁细胞密度达到80%,即可以细胞冻存形式进行保藏,拍照,记录细胞状态;
二、细胞清洗
培养皿表面消毒后,转移至生物安全柜中,去除培养皿中培养液,加入12mlPBS,轻轻摇晃培养皿清洗细胞,随后吸除PBS清洗液;
三、细胞消化
将2ml胰酶加入培养皿中,完全覆盖细胞,置于显微镜下观察(期间禁止摇晃培养皿),当细胞刚开始脱落时,立即转移至生物安全柜中,除去大部分胰酶,剩余约0.5ml胰酶,转移至培养箱内继续消化,每30秒肉眼观察细胞状态,至细胞成流沙状完全脱落,转移至生物安全柜中,加入12ml完全培养基,终止消化;
四、细胞离心
将终止消化后的细胞悬液吹打均匀,吸取至15ml离心管中,1000r/min(110g),离心3min;
五、细胞冻存
离心后去除细胞上清液,按照冻存细胞量5*10^5/ml,吸取冻存液重悬细胞沉淀,吹打均匀后分装至相应的冻存管中,进行冻存;
六、细胞保藏
冻存管做好标记,放至程序降温盒中,于4℃冰箱放置30min,转移至-80℃超低温冰箱过夜,将过夜后的冻存细胞转移至液氮中保藏。
贴壁细胞的保藏方法您GET到了吗?如果对于实验操作还有疑问或者需要其他的技术指导,欢迎致电010-58103778,我们一定悉心为您解答。