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讲师介绍
biorbyt
英国Biorbyt，成立于2011年，总部位于世界科技中心之一的英国剑桥郡，专注于生命科学和生物技术领域，系英国高品质生命科学试剂供应商。主要产品有抗体、小分子、ELISA试剂盒、蛋白等。产品涉及各种科研领域，被许多知名杂志引用，并受到客户的良好反馈。与世界著名高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往全球。
武汉博欧特生物科技有限公司，是英国Biorbyt在中国的办事处。负责英国biorbyt产品在中国区的销售、推广和全球的售后服务。武汉博欧特携手Biorbyt，致力于为客户提供一系列高质量和有绝对价格竞争力的产品，并提供专业的技术服务。
英国biorbyt已通过国际标准化组织（ISO 9001）认证。并获得了“2021年英国女王企业奖”。我们拥有多年实验室经验的专家科学家团队，以及全球强大的经销商网络渠道。
视频介绍
本视频介绍了WB实验操作之电泳，转膜，免疫，成像
Western Blot 的实验方案概括如下：
1. 样本制备和定量：使用组织 / 细胞裂解液提取总蛋白质。蛋白质提取应注意低温操作防止蛋白失活，需要加入蛋白酶抑制剂放在蛋白降解，磷酸化检测样本还需加入磷酸酶抑制剂。
２.SDS-PAGE 胶制备：根据不同分子量的蛋白选择不同浓度的分离胶，自制胶确保没有气泡，不漏胶和上样孔平整，也可以直接使用预制胶。
3. 电泳跑胶：使用电泳根据大小 / 重量分离蛋白质分子，浓缩胶使用低电压（80V）达到浓缩效果，分离胶使用高电压（120V）快速分离蛋白分子。
4. 转膜：将蛋白质分子转移到固体膜上。不同大小的蛋白质转膜时间不同，大分子转膜时间长，小分子转膜时间短。
5. 封闭：一般会使用脱脂奶粉和 BSA 进行非特异性蛋白和背景的封闭。
5. 抗体孵育：一抗，二抗孵育，通过标记物实现目标蛋白可视化。抗体的稀释液，浓度，孵育时间和温度会直接影响孵育效果。
6. 洗膜：洗去未结合的抗体，膜洗涤不彻底会影响结果观察。
7. 结果观察： 成像系统检测到感兴趣的目的蛋白质，观察目的蛋白大小是否符合预期。
