讲师介绍
刘琼瑶
潍坊安普生物科技有限公司的研发部负责人,具有丰厚的实验操作经验和知识积累。
视频介绍
附件视频详细介绍了DNA恒温快速扩增试剂盒的使用过程。
实验需准备:
荧光检测试剂盒(内含铝箔真空包装干粉试剂、buffer、正对照模板)、100μL移液枪、10μL移液枪、黄枪头、白枪头、待测核酸、小离心机、震荡金属浴等。
检测所需的R/A buffer、B buffer需要提前取出,室温放置使其完全融化,振荡混匀离心备用;正对照模板和待测核酸需完全融化,振荡混匀离心后备用。
实验过程:
1.打开试剂盒,取出R buffer(蓝色盖子)、B buffer(绿色盖子)、正对照模板(红色盖子)。取出检测所需要数量的干粉试剂。如有干粉粘在管盖管壁的情况,轻甩几次使干粉下落即可。
2.双手从中间处开始逐个向外依次打开打开8连排时。
3.取100μL移液枪,调至42.5μL,依次加入R/A buffer。
4.取10μL移液枪,调至5μL,依次加入待测核酸。每次操作都应注意足量吸入,添加后枪头内无残留,全部加入管内。每添加一次更换一个枪头,避免交叉污染。
5.取10μL移液枪,调至2.5μL,将B buffer加在盖子上每次操作都应注意足量吸入,添加后枪头内无残留,全部加在盖子上。
6.确认每个盖子上都有足量的B buffer,盖好后逐个按紧,上下颠倒甩8-10次以充分混匀。
7.瞬离3-5秒使反应液全部落回管底。
8.将反应放置在提前预热好的金属浴上孵育混匀,程序设置为42℃静置孵育4分钟,42℃震荡混匀15秒。
反应程序:
该反应可使用常规PCR仪器进行荧光采集,视频中采用的是安普未来的荧光反应仪,反应程序设置如下:RNA反应温度为42℃,30秒/采集,重复30个循环,反应总时长15分钟;DNA或质粒模板反应温度为39℃。