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miRNA一链cDNA合成试剂
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Hifair® miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit
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有效期1年
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
-20度
10T
产品信息
产品名称
产品编号
规格
价格(元)
促销价(元)
Hifair® miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit(加A法)
11148ES10
10 T
995.00
465.00
11148ES50
50 T
3985.00
2185.00
产品描述
microRNA是一类被广泛关注的非编码RNA,长度为22 nt左右,对植物和动物的基因表达有着非常重要的调控作用。本试剂盒采用加A尾法来进行miRNA第一链cDNA的反转录,产品中的2×Hifair® miRNA RT buffer包含了miRNA加A尾反应和逆转录反应的所有原料和引物,并经过精心优化,可保证miRNA 3'末端的Poly(A)修饰过程和逆转录过程同时高效进行。后续qPCR中只需设计特异性正向引物,配合试剂盒中的通用反向引物,即可对样本中的miRNA进行检测。此外,试剂盒中提供了人、大鼠、小鼠通用的 U6 内参上下游引物,可在宽广的区域内得到良好的标准曲线。
本产品推荐与本公司的Hieff® miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix(Cat#11171)配套使用,以获得较好的实验结果。
产品组分
组分编号
组分名称
产品编号/规格
11148ES10(10 T)
11148ES50(50 T)
11148-A
Hifair® miRNA RT enzyme mix
17.5 μL
87.5 μL
11148-B
2×Hifair® miRNA RT buffer
50 μL
250 μL
11148-C
RNase-free H2O
2 mL
10 mL
11148-D
Universal Reverse Primer (10 μM)
800 μL
4 mL
11148-E
U6 Forward Primer (10 μM)
100 μL
500 μL
11148-F
U6 Reverse Primer (10 μM)
运输与保存方式
冰袋运输。-20℃保存,有效期1年。
操作步骤
一、体系配制
室温融化Hifair® miRNA RT enzyme mix和2×Hifair® miRNA RT buffer后轻微颠倒混匀,置于冰上并按下表配置反应体系:
组分
体积 (μL)
终浓度
5
1×
1.75
-
RNA*
X
Up to 10
*总RNA及提取的miRNA的浓度范围10 pg-2 μg,合成的miRNA拷贝数最低可达60 copies,投入体积不超过3.25 μL。
二、逆转录程序
移液器轻轻混匀上述配制的反应液,按下表程序进行miRNA的逆转录反应:
反应温度
反应时间
备注
37℃
50 min
miRNA加A尾及反转录过程
85℃
5 sec
酶失活过程
【注】:逆转录产物可直接进行下游qPCR检测。为避免逆转录体系对qPCR反应的抑制,可将产物稀释10-1000倍后使用。若短时间内不进行下游实验,可放置于-20℃保存。若长期保存,建议分装后,于-80°C保存,避免反复冻融。
注意事项:
1)使用前,将冻存的各组分充分融解并轻轻混匀后使用。
2)实验时,请使用无RNase污染的耗材,避免不必要的损失影响实验结果。
3)本产品避免反复冻融,配制时应避免强光照射。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
5)本产品仅作科研用途!
HB220615
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