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电转感受态细胞TG1

  • 价  格: ¥200
  • 保存条件: -80冷冻
  • 保  质  期: 半年
  • 试用规格: 80uL*2
  • 产  地: 上海
  • 货  号: TG1-E080
  • 品  牌: 武竟
在线询问 已有 1 人申请试用
上海武竟科技有限公司
商家诚信度:
成立时间:2015
入驻丁香通年限:1年
商家等级:金牌客户
产品信息完整度:49.0%
联系人:姚经理

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试用说明

试用申请时间: 2019年09月01日— 2019年09月14日 1. 运费:上海地区客户免运费,江浙地区客户运费自理
2. 发货时间:
3. 申请要求:
4. 其他说明:本次试用活动仅限江浙沪地区客户

产品详情

规格: 80uL 产品价格: ¥200.0
TG1简介 
[F�6�3 traD36 proAB lacIqZΔM15] supE thi-1 Δ(lac-proAB) Δ(mcrB-hsdSM)5(rKmK)
TG1来源于E. coli K-12菌株,生长迅速,37℃平板培养7 h可见克隆;常用于噬菌体展示文库的构建。lacIqZΔM15标记可用于蓝白斑筛选;supE琥珀突变抑制型;不含核酸酶endA1突变,用于质粒提取时推荐使用去蛋白液以去除菌体内大量的核酸酶;TG1除用于文库构建外,还可用于蛋白表达。

产品说明
TG1电击/电转感受态细胞只能用于电击转化,不能用于热激转化。TG1来源于E. coli K-12菌株,是目前生长速度最快的克隆用大肠杆菌菌株,在平板上37℃,7 h可见克隆。主要的噬菌体展示用菌株,同时也可用于普通质粒的构建,lacIqZΔM15的存在使其可以用于蓝白斑筛选等实验;但不含核酸酶endA1突变,体内核酸酶含量较高,提取质粒时推荐使用质粒提取试剂盒中去蛋白液以去除菌体内大量的核酸酶。TG1电击/电转感受态细胞适用于噬菌体展示文库的构建,经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>2×1010 cfu/μg DNA。

产品包装
Electroporation-Competent Cell 80μl/支 
pUC19 (,10pg/μl): 10μl
保质期
-80℃(6个月)


操作方法
1. 将无菌干燥的电击杯插入冰中静置3min,压实冰面以充分降温,电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖。
2. 将电转仪调至1800V电压,200Ω电阻,25μF电容。
3. -80℃保存的电转感受态细胞插入冰中3min融化,加入待电转DNA产物,手指轻弹EP管底混匀避免产生气泡,静置冰中1min
3A. 对于测定转化效率:加入1μl 10pg pUC1940ul电转感受态细胞中。
3B. 对于连接产物,将溶于TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)的连接产物加入感受态细胞中,连接产物浓度<100 ng/μl,转入体积<1/10感受态体积。
4. 200μl枪头将感受态-DNA混合物快速移到电击杯后,轻磕电击杯以去除气泡,盖上杯盖。
5. 将电击杯快速放入电转仪中,按照预设的参数完成电转。
6. 电击后10秒内加入1ml无菌37SOC培养基,将液体全部转移到14ml无菌37摇菌管中,倾斜放入摇床,37℃,220-225 rpm培养1h
6A. 对于测定转化效率:4000rpm室温离心1min收集菌体,重悬后稀释1000倍,吸取100涂布相应抗性的LB平板,37℃平板倒置过夜培养,计数菌落。
6B. 对于连接产物:1ml LB菌液可以涂布3-590mm相应抗性的LB平板,37℃平板倒置过夜培养。

注意事项
1. 待电转的DNA(质粒或连接产物)体积不应超过感受态体积的1/10,浓度<100ng/ul
2. 使用0.1cm的电击杯的转化效率最高,且其电火花产生的几率最小。
3. 电击前的每一步均应避免产生气泡,气泡会导致弧光放电。
4. DNA中混有乙醇,蛋白等污染时,转化效率急剧下降。
4. 推荐使用高纯DNA(质粒或连接产物),避免离子杂质在电击时产生电流和弧光放电的风险。
5. 时间恒定值应在4.5-5.5ms之前,如果时间恒定值小于4.3ms,则需要重新纯化DNA
6. 我们使用的电击条件:1800V电压,200Ω电阻,25μF电容,Bio-Rad电转仪
7. 质粒越大,转化效率越低。




 
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