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克隆酶GsmartI-T4-DNA-Ligase(5-Weiss-Unit)

  • 价  格: 询价
  • 试用规格: 10ul
  • 货  号: GWC300D
  • 品  牌: 金唯智
在线询问 已有 13 人申请试用
金唯智-GENEWIZ
商家诚信度:
成立时间:2010
入驻丁香通年限:7年
商家等级:金牌客户
产品信息完整度:80.0%
联系人:金唯智

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电话:400-8100-669

邮件:Enews.china@genewiz.com.cn

传真:0512-62629530

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* 试用品 克隆酶GsmartI T4 DNA Ligase(5 Weiss Unit) (13 人申请)
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试用说明

试用申请时间: 2018年12月11日— 2019年01月31日 1. 运费:询价
2. 发货时间:提交申请后发货
3. 申请要求:无
4. 其他说明:无

产品详情

规格: 10ul 产品价格: 询价

产品名称:GsmartI T4 DNA Ligase

货号:GWC300

浓度:5 U/ul

有效期:24个月

保存条件:-20℃

产品内容

产品组成

GWC300S

GWC300M

GWC300L

500U

1000U

2500U

GsmartI T4 DNA Ligase

100 ul

200 ul

500 ul

 

2×T4 Quick Buffer

1ml

2ml

5ml

 

产品简介

GsmartI T4 DNA Ligase催化双螺旋DNA或RNA的3’端羟基和5’端磷酸基形成磷酸二酯键。该酶修复双链DNA、RNA和DNA/RNA杂合体中的单链缺口。连接粘性或平末端DNA片段,GsmartI T4 DNA Ligase需要ATP作为辅助因子。

应用

  • 用于限制性内切酶酶切的DNA片段的克隆;
  • PCR产物的克隆;
  • 连接双链寡核苷酸接头到DNA上;
  • 定点突变;
  • 扩增AFLP;
  • 连接酶介导的RNA检测;
  • 双螺旋DNA、RNA或DNA:RNA杂合体的缺口修复;
  • 线性化的DNA自连;

活性单位定义:

37℃ 20min催化1nmol 32PPi生成可吸附的活性炭形式的酶量定义为一个活力单位,即1 U.

储存液

20 mM Tris-HCl (pH 7.5),50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA and 50% (v/v) glycerol

2×T4 Quick Buffer

80 mM Tris-HCl, 20 mM MgCl2, 20 mM DTT, 1 mM ATP (pH 7.8 at 25℃).

抑制或失活条件:

  • 当NaCl或KCl的浓度大于200mM时强烈抑制GsmartI T4 DNA Ligase的活性。
  • 65℃10min或70℃ 5min可以使GsmartI T4 DNA Ligase失活

DNA与载体连接:

  • 粘性末端连接:
  1. 反应体系

Linear DNA

20-100ng

Insert DNA

1:1-5:1(插入片段:载体,molar ratio)

2×T4 Quick Buffer

10 ul

GsmartI T4 DNA Ligase

1 ul(5U)

灭菌水

补水至20ul

  1. 22℃孵育30min
  2. 50ul化转感受态用5ul连接产物,50ul电转感受态用1-2ul连接产物
  • 平末端连接:
  1. 反应体系

Linear DNA

20-100ng

Insert DNA

1:1-5:1(插入片段:载体,molar ratio)

2×T4 Quick Buffer

10 ul

GsmartI T4 DNA Ligase

1 ul(5U)

灭菌水

补水至20ul

  1. 22℃孵育30min
  2. 取5ul连接产物到50ul化转感受态;电转前纯化DNA,用纯化试剂盒或酚氯仿抽提,取1-2ul到50ul电转感受态.

注:如果连接产物用于电转,用柱纯化或酚氯仿抽提纯化DNA,代替热失活GsmartI T4 DNA Ligase.

注:以下方法可以提高电转效率:

  • 70℃ 5min或65℃10min加热失活GsmartI T4 DNA Ligase
  • 纯化DNA:用商业化试剂盒或酚氯仿抽提
  • 延长反应时间
  • 20ul反应体系中如果使用超过2 U的GsmartI T4 DNA Ligase,电转前需要纯化DNA(过柱或酚氯仿抽提)
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