Q:为何前端(靠近正极)的 DNA 条带很淡或根本看不见?A:跟 EB 一样,电泳时本产品朝负极方向移动,当前端的DNA(最小片段)进入没有本产品的区域时,已经结合的染料分子会逐渐从 DNA 分子上脱落,所以条带会变淡或根本看不见。解决办法之一是缩短电泳时间或电泳后再染色;之二是在每100mL电泳缓冲液中补加 3-5uL 染料。
Q:用 SYBR 染色的 DNA 在电泳时为何容易发生条带模糊和扭曲现象?A:SYBR 染料一般与 DNA 的小沟结合,但在常规电泳条件下该结合并不牢固,染料分子可以在标记的和未标记的 DNA 分子之间转移,使DNA 分子的泳动速度时快(无染料结合时)时慢(有染料结合时),发生条带模糊和扭曲现象。嵌入型染料(如EB和本产品)与 DNA 结合牢固,则无此现象。
Q:核酸染料是否都有毒性? A:核酸染料对动物和人的毒性由多方面决定。一是染料的膜通透性,EB被归类为强诱变剂是由于其分子量较小,容易进入细胞内。而 EB 二聚体EthidiumHomodimer(EthD)嵌入 DNA 的能力比 EB 强上千倍,但毒性很小,就是由于其分子比EB大,不能透过细胞膜,所以毒性反而更低。SYBR 系列染料虽然低毒,但由于一般都溶于 DMSO(因为容易水解,不能使用水溶液做溶剂)中,所以如果溅到皮肤表面,更容易进入皮肤。二是染料是否容易被人体降解。比如EB在体外就很难降解,一旦进入体内能在人体内残留的时间可能比较长,增加了毒性;而SYBRGreenI等染料(也能以嵌入方式与 DNA 结合)由于不稳定,比较容易自然降解,所以毒性自然较低。三是降解产物是否有毒性,比如用很多方法(如强碱法)降解EB得到的产物有的比 EB 毒性更大,而有的染料降解产物毒性却低很多,甚至无毒。四是染料进入细胞核以后是否能跟 DNA 结合,很多实验结果显示即使EB染料也很难嵌入型到染色体中,因为染色体中的 DNA 已经紧密地与各种组蛋白结合。五是细胞修复突变的能力,正常人体都有很强的修复突变的能力,如修复日光中UV诱导的DNA突变。总之,一种 DNA 染料的毒性强弱是多种因素综合的结果。关联产品 核酸电泳染料(可见光型