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2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)
无
有效期1年
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
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100 μL (CAT#10154ES01)/1mL (CAT#10154ES03)/5×1mL (CAT#10154ES08)
| 规格： | 100 μL (CAT#10154ES01) | 产品价格： | ￥105.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 1mL (CAT#10154ES03) | 产品价格： | ￥585.0 |
| 规格： | 5×1mL (CAT#10154ES08) | 产品价格： | ￥1655.0 |
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)是即用型2×预混合溶液，包含Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase，dNTPs以及优化的缓冲体系。预混液中添加了常温可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的两种单克隆抗体，可简便地进行高特异性的Hot Start PCR。预混液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增目的片段的长度可长达13 kb，该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍，是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。适用于复杂模板的扩增，扩增产物为平末端。
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，反应体系只需加入引物和模板即可，并可以通过两步法的程序进行扩增，简化了实验步骤，节省了时间。本产品中含有电泳指示染料，PCR产物可直接进行电泳。另外，该产品还含有特异保护剂，使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。
产品应用
基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。
运输与保存方法
冰袋运输。-20°C保存。有效期1年。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！
推荐PCR反应体系
| 组分 |
体积 |
终浓度 |
| ddH2O |
to 50 μL |
- |
| DNA模板 |
适量 |
- |
| Primer正向 (10 μM) |
2 μL |
0.4 μM |
| Primer反向 (10 μM) |
2 μL |
0.4 μM |
| 2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye) |
25 μL |
1× |
【注】：1）聚合酶终浓度：在1×预混液含有1 U/50 μL的聚合酶。
2）引物：PCR反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM，推荐0.4 μM。
3）Mg2+、dNTPs终浓度：在1×预混液含有2 mM Mg2+和200 μM的dNTPs。
4）不同模板的推荐使用量（25 μL反应体系）：
| 模板种类 |
扩增片段1 kb-10 kb |
| 基因组DNA |
50 ng-200 ng |
| 质粒或病毒DNA |
10 pg-20 ng |
| cDNA |
1-2.5 μL（不超过PCR反应总体积的1/10） |
PCR扩增程序
有以下三种程序可选择，优先选择两步法程序。
| 两步法程序（优先推荐）： | 三步法程序（常规程序）： | |||||||
| 循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
| 预变性 |
98°C |
3 min |
1 |
预变性a |
98°C |
3 min |
1 |
|
| 变性 |
98°C |
10 sec |
30-35 |
变性 |
98°C |
10 sec |
30-35 |
|
| 延伸 |
68°C |
30 sec/kb |
退火b |
60°C |
20 sec |
|||
| 终延伸 |
72°C |
5 min |
1 |
延伸c |
72°C |
30 sec/kb |
||
| 终延伸 |
72°C |
5 min |
1 |
|||||
| 梯度温度退火程序（难扩增基因推荐程序）: | *不同扩增程序下的特点： | |||||||
| 步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
程序类型 |
两步法 |
三步法 |
梯度退火 |
|
| 预变性 |
98°C |
3 min |
1 |
速度 |
最快 |
中等 |
慢 |
|
| 变性 |
98°C |
10 sec |
15，每个循环降低1℃ |
特异性 |
高 |
中等 |
高 |
|
| 梯度退火 |
70-55°C |
20 sec |
PCR产量 |
中等 |
最高 |
中等 |
||
| 延伸 |
72°C |
30 sec/kb |
检出率 |
高 |
中等 |
高 |
||
| 变性 |
98°C |
10 sec |
20 |
|||||
| 正常退火 |
55°C |
20 sec |
||||||
| 延伸 |
72°C |
30 sec/kb |
||||||
| 终延伸 |
72°C |
5 min |
1 |
|||||
【注】：
a. 预变性温度和时间：推荐温度：98°C，时间：3 min，高GC含量模板5-10 min。
b. 退火温度和时间：推荐温度：60°C，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
c. 延伸温度和时间：推荐温度：72°C。时间：30 sec/kb，复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。
相关产品
| 产品名称 |
货号 |
规格 |
| Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶 |
10153ES60/76/80 |
100 U/500 U/1000 U |
| Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶 |
10148ES60/76/80 |
100 U/500 U/1000 U |
| 2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶预混液 |
10149ES03/08 |
1 mL/5×1 mL |
| Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒HOT |
10909ES20 |
20 T |
| Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Simple Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒（不含MCS多克隆酶切位点） |
10910ES20 |
20 T |
| Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit 一步法快速克隆试剂盒HOT |
10911ES20 |
20 T |
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10912ES10 |
10 T |
| Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit 定点突变试剂盒HOT |
11003ES10 |
10 T |
| Hieff MutTM Multi Site-Directed Mutagenesis Kit 多点突变试剂盒HOT |
11004ES10 |
10 T |
HB211222
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