人血管化肾类器官分化试剂盒

价格 ￥5625
品牌弗元生物 Fuyuanbio
货号 RC200134
产地上海
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更新日期 2023年09月27日

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品系：
无
ATCC Number：
无
细胞类型：
干细胞
肿瘤类型：
无
CAS号：
无
供应商：
弗元（上海）生物科技有限公司
数量：
100
注册证号：
无
英文名：
Human Vascularized Kidney Organoids Differentiation Kit
生长状态：
良好
年限：
1
运输方式：
冷冻
器官来源：
无
是否是肿瘤细胞：
否
细胞形态：
无
免疫类型：
无
物种来源：
人
相关疾病：
无
组织来源：
无
规格：
KIT

货号	产品名称	目录价（元）
RC200134	人血管化肾类器官分化试剂盒	5625

人肾类器官分化试剂盒
仅用于科学研究
产品信息
产品名称：人肾类器官分化试剂盒
货号：RC200134
批号：见包装
试剂清单：

序号	名称	数量	货号	存储
1	S1完全培养基	50 ml ×1	RC200134-1	-20至-80 ℃
2	S2完全培养基	50 ml ×1	RC200134-2	-20至-80 ℃
3	S3完全培养基	50 ml ×1	RC200134-3	-20至-80 ℃
4	S4完全培养基	100 ml ×2	RC200134-4	-20至-80 ℃
5	基础培养基	500 ml ×1	RC200134-5	2-8 ℃

存储与有效期：
组分1、2、3、4于-20至-80 ℃避光保存，必须避免反复冻融；首次完全解冻后可以按使用量进行分装，置于-20至-80 ℃长期保存；2-8 ℃条件下，稳定储存2周。组分5于2-8℃避光保存，有效期1年。
适用范围：
本试剂盒适用于人多能干细胞（胚胎干细胞、诱导多能干细胞）定向肾系细胞分化，同时进行立体培养，形成血管化肾类器官。
产品介绍
类器官与悬浮培养是当前再生医学研究与应用的前沿，是未来再生医学与组织工程发展的趋势。为适应日益发展的科研需求，并为生命科学尤其是再生医学研究的需要，开发优化了相关产品，可以为科研工作者提供稳定的研究平台，以助力研究的时效性和经济性。该产品设计同时考虑再生医学临床前研究的需求，可以为研究人员提供大量稳定的种子细胞，加速应用后期技术的研发。
本产品无血清、成分明确、含有细胞保护因子，适合于人多能干细胞向血管化肾类器官的诱导。
操作方法
实验准备
u 完全培养基准备：
组分1-4（S1、S2、S3、S4）均为完全培养基：2-8℃解冻。完全融化后轻轻摇匀，可以按照实际使用量分装。分装后立即存储于-20至-80 ℃，避免反复冻融。
注意：2-8℃冰箱过夜，切不可置于37℃水浴剧烈解冻，解冻后请务必充分混匀，以保证培养基成分的均匀度。
u 自备试剂耗材：
l  多能干细胞完全培养基
l  基质胶
l  贴壁细胞培养板
l  细胞固定液（2-4%中性多JU甲醛）
操作方法
1.   S1阶段：人多能干细胞生长至约60%汇合开始血管化的肾类器官诱导分化，要求人多能干细胞克隆形态良好。用基础培养基（RC200134-5）洗细胞2次，加入S1完全培养基，每天换液，连续4天；该阶段为原条（primitive streak）诱导阶段，有部分细胞死亡为正常现象。
注意：以上操作方案以六孔板为例，若使用其他器皿可以根据需要自行调整方案。调整方案时建议以细胞密度为稳定因素。细胞培养箱条件为37℃、5% CO₂、饱和湿度。所有培养基在使用前必须进行室温复温。这些注意事项同样适用于以下步骤。
2.       S2阶段：诱导第5天，用基础培养基轻柔洗细胞2次，加入S2完全培养基，每天换液，连续3天。
注意：移液枪吹打细胞时务必轻柔，切不可产生大量气泡，本试剂盒全程均需注意此问题。
3.       S3阶段：诱导第8天，用基础培养基轻柔洗细胞2次，加入S3完全培养基，每天换液，连续4天。
4.       S4阶段：诱导第12天，用DPBS轻柔洗细胞2次，加入适量（6孔板每孔加入1 ml）消化液Accutase，同时加入终浓度为10 μM的Rock抑制剂以提高细胞存活率。细胞消化约3-6分钟，待细胞易吹下即加入适量S4完全培养基终止消化。800 转/分离心5分钟，弃上清；用适量S4完全培养基重悬细胞，同时加入终浓度为10 μM的Rock抑制剂。细胞接种于低黏附的6孔板（6孔板一个孔消化的细胞接种于一个低黏附6孔板的一个孔，S4完全培养基加入量为2-3毫升每孔），培养过夜后细胞聚团成球，每天用S4完全培养基换液（不需添加Rock抑制剂）。培养过程中可通过低速离心的方式去除死细胞（建议200转/分，死细胞不会沉底，弃上清即可去除死细胞）。若细胞团块过大，可以用枪头轻柔吹打至均一大小，培养至第24天。
5.       推荐检测：第1天、4天、14天及26天的各阶段标志物。第1天检测多能干细胞标志物，如OCT4、SOX2等；第4天检测原条阶段的标志物，如T/Brachyury、MIXL1等；第14天检测肾相关标志物，如SIX2、NPHS1等，及血管标志物KDR；第24天检测相对成熟肾标志物，如JAG1、CDH1等。
特别提示：以上所有操作均在无菌细胞培养室进行，细胞开放操作要在生物安全柜内进行；该研究常用的培养器皿包括培养皿、培养板，也可自行设计方案使用细胞培养瓶、细胞工厂等，请根据实验需要自行选择；细胞的初始状态对分化的成功至关重要，请务必保证初始细胞的可靠性。该试剂盒仅用于定型内胚层细胞向肾类器官分化的研究，用于其他研究时该操作规程仅作为参考。

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