人尿液中的多种阿片类依赖治疗药物测定
背景
对疑似中毒快速而有效的检测和确认，对医院治疗创伤病人来说非常重要，尤其是一些试图自杀，意外中毒或不良药物反应而造成的突发情况。很多方法应用其中，如GC，GC-MS，LC-MS。近年来，LC-MS（特别是LC-MS/MS）在司法毒物学实验室的应用显著增加，尤其对于气相色谱（GC）很难分析的极性、不挥发和热不稳定等化合物非常有用。另外，简化的前处理方法以及相对于GC/MS保留时间短等优点，使这项技术对注重工作效率和需要快速报告结果的实验室有极大的吸引力使LC-MS/MS 方法成为许多重要滥用中毒药物分析的首选方法。
发达国家中，0.4-0.8 %的成年人对非法阿片类物质有依赖性。通常的治疗方法包括强制戒毒以及使用替代治疗药物。美沙酮，丁丙诺非和二氢可待因最近发现能够有效地成为替代治疗药物。对尿液的分析是监测戒瘾和确证复发的重要方法。
解决方案
方法
LC系统： Waters ACQUITY UPLC系统
质谱仪： ACQUITY TQD
色谱柱： ACQUITY UPLC HSS T3柱（2.1 x 100mm，1.8μm）
柱温： 30℃
流速： 300μL/min.
流动相A： 含有0.025 %甲酸的5 mM乙酸铵水溶液
流动相B： 甲醇
梯度： 5 min 15-95% B
样品制备方法
250μL尿样加入10μL的内标后进行酶水解。将pH 5的1M乙酸钠20μL和β-葡萄糖醛酸酶10μL加入到样品中，然后在56℃下加热1小时。水解后向样品中加入饱和的二钠四硼酸盐缓冲液250μL，再用二氯甲烷、正己烷、乙醚和异戊醇（30:20:50:0.5）的混合溶液进行液液萃取。在氮气保护下用样品浓缩仪将上层液进行浓缩干燥，然后溶解于50:50的甲醇和流动相A溶液混合液中 （250μL）。
结果
所有的化合物结果都成线形关系（相关系数r2 = >0.997）。2-乙基-1，5-二甲基-3，3-二苯吡咯烷（EDDP）的检测限为0.5 ng/mL，美沙酮（METH）和二氢可待因（DHC）为1ng/mL，丁丙诺啡（BUP）和去甲丁丙诺啡（NBUP）为2ng/mL。所有化合物按照三种质控浓度（其中BUP & NBUP为7.5，50 and 200ng/mL以及METH，EDDP & DHC为75,500 and 2000ng/mL)加入到空白尿样（n=5）中分析评价日内准确度和精密度，5天结果作为日间精密度。精密度CV<14 %，准确度在96-115 %之间。
总结
沃特世开发的分析方法对目标化合物有较高的准确度和精密度，而且每个样品的分析时间只有6.5分钟。这个方法对患者样品中的美沙酮，EDDP，丁丙诺啡和去甲丁丙诺啡的含量成功地进行了分析，并且定量数据结果和以前建立的方法也有很好的相关性。这个方法能够快速地对阿片类药物成瘾治疗的病人尿样进行分析，能够用一种方法检测出所有治疗药物的浓度。方法还节省了50%样品处理的时间，大大提高了分析实验室的工作效率和收益。
如需了解更多临床检测方法开发和方案，请联系沃特世临床专家 tao_jiang@waters.com 或 021-6156 2666。
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