ADS 到 KLC 的转分化过程能够对表皮细胞分层结构发生改变
皮肤再生已成为当下最重要的研究领域之一,尤其是大面积的皮肤缺失从而需要植皮的情况。人体 ASC(脂质来源的干细胞)在体外间充质系和非间充质系的表现形式不同,进而能够确定它们的分化能力。由于分化能力的多样性,获取简易使得 ASC 被列于以干细胞为基础的治疗方法的首位。该片文章于 2013 年 7 月发表于 Plos One 杂志上。
在该文章中,假设 ASC 能够在间充质系中分化并且改变分层表皮结构。ASC 利用流式细胞仪提取。筛选后的 ASC 细胞与角质细胞或者角质细胞培养基中。14 天后,ASC 使得人体角质细胞形状改变。特殊的角质细胞标记物包括 KLC 中 cytokeratin-5, involucrin, filaggrin 和 stratifin;但这些标记物都不存在于 ASC 中。组化分析得出,当在 EGF 和高 Ca+浓度环境中培养时,分层结构与正常结构的皮肤观察时是相似的。而且,免疫组化分析确定上述特殊标记物的存在。
总而言之,该片文章首次提出 ASC 具有在 KLC 中转分化和改变分层表皮结构的能力。脂肪组织能够作为角质细胞形成,特别是严重的创伤导致大面积皮肤受损需要促进表皮形成时的良好的资源。
该片文章中在 ASC 利用特殊标记物(cytokeratin-14,involucrin,filaggrin 和 stratifin)进行染色后利用 DAPI 进行复染。染色强度进行定量分时利用了奥地利 TissueGnostics 公司的 TissueFAXS 系统进行扫描,然后 TissueQuest 软件进行分析。每次同时分析三个样本,后得出阳性细胞的数量及比值。
ASC 细胞在不同的时间点进行染色。A 图中 ASC 利用 cytokeratin-14 进行染色后再利用 DAPI 进行复染色。图中显示 cytokeratin-14 和 DAPI 阳性细胞的比例逐步增加。B 图中 ASC 利用 involucrin 和 stratifin 进行染色后利用 DAPI 进行复染,图中依然显示阳性细胞比例增加。
表 2 中对转分化 ASC 到 KLC 进行定量分析。取时间点 0,7 天,14 天和 28 天,42 天。采用 TissueQuest 分析软件,得到阳性细胞数与比例值。
相比传统扫描工具 TissueFAXS 能够做到同时对多组样本进行扫描,效率及分辨率高。