检测方法

建议在每次临床标本检测时，同时分析质控品、阴性对照。 

1. 取亚硫酸盐修饰后待测样本 DNA。 

2. 试剂盒室温解冻，从试剂盒中取出 PCR 反应液和 DNA 聚合酶，颠倒混匀。 

3. 按检测标本数量，加上质控品和阴性对照，计算需要的 PCR 反应液和 DNA 聚合酶体积，以下表为例，如果检测 3 个样本，分别取 75µL PCR 反应液和 1.5µL DNA 聚合酶，加入一个新的 EP 管中，颠倒混匀，瞬时离心。 

4. 把 PCR 反应管按顺序摆放在 PCR 管架上（做好标记），轻轻揭开 PCR 反应管的管盖。分别取上述混匀的试剂（PCR 反应液和 DNA 聚合酶）15µL 加入 PCR 反应管，再加入 DNA 样本 5 µL，颠倒混匀（切勿振荡混匀），小心盖上反应管盖，瞬时离心。 

5. 按步骤 3 的方法，在反应管中分别加入处理好的质控品和阴性对照，及时盖好封盖。 

6. 做好标记（使用 ABI7500 等检测系统时，不要在反应管盖上做任何标记，以免影响荧光检测），瞬时离心后把 PCR 反应管放入仪器。 

7. 打开仪器设置窗口，设置 PCR 扩增与信号收集程序。 

a) 第一阶段：95 ℃，10 分钟，1 个循环； 

b) 第二阶段：95 ℃，15 秒， 60℃ 30 秒，5 个循环； 

c) 第三阶段：95 ℃，15 秒， 57℃ 30 秒，40 个循环； 

信号收集：第三阶段 57℃ 时收集 FAM、 VIC（或 HEX）和 CY5 信号。 

注! 本扩增程序仅供参考，某些 PCR 设备扩增程序可能需要作适当调整, 具体请咨询本

公司技术服务。 

8. 保存文件，运行程序。 

【阳性判断值】 

编辑： zhuq    来源：丁香园