从全血中直接分选细胞亚群（无需过柱或使用磁极）

从全血中分选细胞，可选择 RosetteSep™。RosetteSep™ 基于免疫密度梯度分选平台，通过密度梯度离心分离特定的细胞亚群。RosetteSep™ 首先将不需要的细胞与样本中的红细胞（RBC）交联，形成免疫玫瑰花结构（immunorosettes）。免疫玫瑰花结构在密度梯度离心（例如使用 Lymphoprep™）过程中会沉淀，使高纯度的目的细胞留在血浆和密度梯度离心液之间的界面。 

下述为通常使用的实验步骤；具体的实验条件可根据需要富集的细胞类型来调整。请参阅 RosetteSep™ 用于特定细胞类型的实验步骤。

对于 NK 细胞和淋巴细胞高通量分选的实验步骤，请参见本页底部。

1. 确保血液样本，PBS+2% FBS（磷酸盐缓冲液+2% 胎牛血清）和密度梯度离心液，均在室温（15～25 ℃）放置和离心。

2. 在样本中加入 RosetteSep™ 抗体并混合均匀。

3. 在室温孵育 20 分钟。

4. 用等体积的 PBS+2% FBS 稀释样本并轻轻混匀。

5. 将稀释的样本加于密度梯度离心液之上（推荐使用的样本和密度梯度离心液体积请见表 1）；请注意尽量避免密度梯度离心液和样本混在一起。

表 1. 推荐的体积和试管容量

使用 50 ml 离心管时，加入最少 15 ml 的密度梯度离心液将更易于收获经富集的细胞层。

6. 在室温 1200 g 离心 20 分钟，关闭刹车。

7. 从密度梯度离心液和血浆之间的界面收集富集的细胞。

8. 有时会较难分辨中间界面的细胞层，特别是在富集稀有细胞时；在这种情况下，可将部分密度梯度离心液和富集的细胞层一同取出以最大化回收率。

9. 加入 PBS+2% FBS，300 g 离心 10 分钟，刹车档位放在低速，弃去上清；重复此步骤。 

请注意：我们推荐使用氯化铵来去除样本残余的红细胞，来避免红细胞对下游分析或流式检测的干扰；氯化铵裂解可在其中一个洗涤步骤中进行。

10. 获得的富集细胞可用于您的下游应用。

NK 细胞和白细胞的高通量分选步骤

传统的从血液中分选白细胞的方法耗时耗力，并需要细致和专业的操作。通常需先使用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMCs），然后使用基于分离柱的免疫磁珠分选系统来进行细胞亚群的富集。使用这些传统方法，从 450 ml 血液中分选高纯度的自然杀伤细胞（NK 细胞）操作过程漫长（最长需 4 小时），并且使用这些方法很难较快且高效地处理多个样本¹。

新的 RosetteSep™ 和 SepMate™ 体系可以更快更高效地处理血液样本，且不会损伤细胞在下游分析中的功能或性能。马里兰大学医学院的 Ajay Jain 教授和他的同事在日常工作中，需要从大量的人源样本中分选 NK 细胞。为了简化工作流程并实现高通量的样本处理，Jain 教授的实验室采用了新的 RosetteSep™ 和 Sepmate™ 细胞分选体系来取代他们以前使用的分选柱方法。 

如需要详细的实验方法，请参阅 Journal of Immunological Methods 上的文献¹。

参考文献

1. So E.C et al. (2013) A high throughput method for enrichment of natural killer cells and lymphocytes and assessment of in vitro cytotoxicity. J Immunol Methods 394(1–2): 40–48.