使用血细胞计数板计算有核细胞

细胞计数对于分选后的数据分析非常关键。为了得到最准确的结果，有核细胞计数需要使用含亚甲基蓝的 3% 乙酸。

请观看该视频了解怎样准备样本以便使用血细胞计数板计数细胞。

使用含亚甲基蓝的 3% 乙酸计算有核细胞总数：

通过这个计数方法可得到样本中的有核细胞总数。乙酸裂解细胞膜后，亚甲基蓝进而标记细胞核。因为成熟红细胞没有细胞核，因此使用此方法计数排除了红细胞。

1. 充分混匀单细胞悬浮液，并使用 PBS 或无血清溶液适量稀释。为了保证浓度的精确性，至少要在稀释液中加入 20 µL 细胞原液。

例如：准备 10 倍稀释液
• 在微型离心管或者 96 孔板中加入 180 µL 含亚甲基蓝的 3% 乙酸（产品号 #07060）
• 细胞悬液混匀后，取 20 µL 加入上一步含亚甲基蓝的 3% 乙酸的管或孔中。

请注意：经过适量的稀释后，适当的细胞浓度应该在血细胞计数板的每个方格（大的方格）中获得 50 到 100 个细胞。我们推荐从 10 倍稀释开始，但是最适合的稀释浓度取决于起始样本中的细胞数量。

2. 使用干净的盖玻片盖住血细胞计数板。

3. 使用毛细管或者移液枪将一小滴（约 10 µL）经染色的细胞稀释液滴加到血细胞计数板上的盖玻片边缘，要小心不要移动盖玻片。

4. 将血细胞计数板置于双筒显微镜上，调节显微镜到 10 倍镜并聚焦。如图 1 所示，计算四个外侧方格中每个方格的细胞数（核被染色的细胞），只计算下边和左边压线的细胞，而右边和上边压线的细胞不予计算（如图 2 所示）。每次最少计算 50 个细胞。我们建议每个方格计数大约 50～100 个细胞。

请注意： 如果每个大方格中的细胞超过 100 个或少于 50 个，请使用更大或更小的稀释倍数重新准备稀释样本。

5. 血细胞计数板中九个大方格中的每个方格代表 0.1 mm³ 的体积。因为 1 cm³  等于 1 mL，细胞浓度可以用以下公式得出：每毫升中有核细胞总数 = 每个方格内细胞的平均数 × 细胞稀释比例 × 10⁴

编辑： z翟某某    来源：丁香园