CFU 检测中造血祖细胞的培养与分析

CFU（集落形成单位）检测是对造血干细胞与祖细胞（HSPCs）分析最为广泛使用的方法之一。CFU 检测可以量化一个样品中个别细胞的增殖以及分化能力。这些细胞的潜能可以通过观察由每个接种的祖细胞所产生的集落（更多分化的细胞所组成）来衡量。大约 14 天的培养足以使集落生长到允许准确计数和鉴定的大小，尽管在某些情况下培养时间可以更短。

此前，我们介绍了与 CFU 检测相关的主题，比如使用 HetaSep™ 富集的造血细胞样本的合适的铺板密度，以及在培养过程中确保适量的水分。正确地进行 CFU 检测的下一步是通过合适的鉴定及计数方法来分析形成的集落。

在培养物中获得的集落数量以及类型，主要取决于接种的细胞数量以及所使用的 MethoCult™ 培养基。完全 MethoCult™ 培养基（比如 MethoCult™ H4434 Classic）含细胞因子，包括促红细胞生长素（EPO），支持粒细胞、单核细胞、红系细胞以及混合集落的生成。所谓混合集落，即包含以上三个谱系细胞加上巨核细胞集落。这些集落可以根据细胞形态学加以鉴别，至于红系以及混合集落，可以通过表达血红蛋白的细胞中观察到的红色加以鉴定。

精确地识别于培养物中的不同类型的集落并非一项简单的功夫，特别是对于实验新手，或者使用了非典型的细胞来源或样品。若要精通 CFU 检测的计数与分类，由经验丰富的实验人员进行培训，往往是不可或缺的一步。

简化 CFU 检测分析同时仍然获得关于谱系特异性祖细胞生长的信息的一种方法是在谱系特异性 MethoCult™ 培养基（见表 1 和 2）中进行测定，这样所有的集落都源于一种类型的祖细胞亚型，例如，只有 CFU-GM 或 BFU-E。也可以使用 STEMvision™ 仪器自动进行集落计数和分类，以进行人和小鼠 CFU 检测的成像和分析。分析软件采用专门针对特定 MethoCult™ 培养基配方设计的分析软件包（表 1 和表 2）。STEMvision™ 的一个重要优势是它消除了手动计数的主观性，并允许实验室内和实验室之间对 CFU 检测进行标准化。 STEMvision™ 还可用于手动集落识别和计数的应用程序，因为软件对每个培养孔进行高清晰度成像。这些图像可以随时作为人工计数的基础，另外还可以创建集落的永久记录，这些记录可以在以后再次进行重新分析。

人样品的 CFU 检测

人 CFU 测定可以在支持多种祖细胞谱系生长的培养基中进行，或在促进谱系特异性祖细胞生长的培养基中进行。使用 STEMvision™ 仪器进行自动计数可提供集落的总数，并将其分类为人祖细胞的各种亚型。

表 1. 人祖细胞亚群的培养基

* STEMvision™ 分析软件包可以提供由脐血**、骨髓或者外周血衍生的集落的计数。
** MethoCult™ Express 培养基配合 STEMvision™ 人脐血 7 天分析软件包，只用 7 天即可对脐血中的 CFU 总数进行测定。

小鼠样品的 CFU 检测

小鼠 CFU 检测可以使用一般培养基，支持粒细胞/巨噬细胞和红系细胞集落的形成；或者可使用谱系特异性培养基，以分别促进粒细胞/巨噬细胞或红系集落的生长。若使用同一个的细胞样品，在以下特定的培养基中进行平行检测，STEMvision™ 分析软件包可计数每种培养基中所生成的集落总数，并提供有关多谱系、髓系和红系集落潜能信息。

表 2. 小鼠祖细胞亚群的培养基

* STEMvision™ 分析软件包只能用于小鼠骨髓的 CFU 检测。

欲获取有关使用 MethoCult™ 和 STEMvision™ 使用和分析 CFU 检测的更多信息，请联系 info.cn@stemcell.com。