基因编辑产品

一、CloneR™（产品号 #05888/05889）

——提高 hPSCs 的克隆效率和单细胞培养的存活率

人多能干细胞（hPSCs）的基因组编辑非常依赖于单个细胞的存活来建立克隆细胞系。CloneR™ 是一种成分确定、不含血清的添加物，可提高 hPSCs 以单细胞状态培养下的存活率和克隆效率，特别是在克隆性和低密度接种条件下（图 1）。该灵活的添加物用于无饲养层培养系统，与 TeSR™ 维持培养基、一系列细胞培养基质及细胞系兼容（图 2）。与现有方法不同，CloneR™ 使得克隆 hPSC 系在无需通过单细胞驯化下稳定生成，从而最小化获得遗传异常的风险。

CloneR™ 优势

◆ 高效。显著提高以低密度培养 hPSC 细胞的存活率。

◆ 简便。无需驯化细胞适应单细胞传代。

◆ 灵活。与任何一款 TeSR™ 系列的培养基和您所选择的细胞培养基质兼容。

◆ 显著。可提高多种人 ES 和 iPS 细胞系的克隆效率。

图 1. CloneR™ 增强了在低接种密度下 hPSCs 的克隆效率
（A-D）与接种到含有 ROCK 抑制剂（10μM Y-27632）的 TeSR™ 中的细胞相比，接种到添加了 CloneR™ 的 TeSR™ 中的 hPSCs 表现出显著提高的克隆效率。（A,B）第七天，在 12 孔板的单个孔内，经碱性磷酸酶染色的克隆的典型图片。H1 hES 细胞以克隆密度（每孔 100 细胞, 25 细胞/cm²）接种到添加有（A）ROCK 抑制剂或（B）CloneR™ 的 mTeSR™1 中，基质为 Vitronectin XF™。细胞以（C）克隆密度（25 细胞/cm²）接种到 mTeSR™1 或 TeSR™-E8™ 中或（D）通过使用 FACS 的单个细胞沉积（以单细胞每孔）接种在 mTeSR™1 中。

图 2. 用 CloneR™ 进行 hPSCs 单细胞克隆的工作流程
第 0 天，将 hPSC 以克隆密度（例如 25 细胞/cm²）的单细胞进行接种，或在 96 孔板中以每孔沉积 1 个细胞。使用的培养基为添加了 CloneR™ 的 TeSR™（mTeSR™1 或 TeSR™-E8™）。第 2 天，向细胞中加入含有 CloneR™ 添加物的 TeSR™ 培养基。从第 4 天开始细胞在不含 CloneR™ 的 TeSR™ 培养基中维持培养。在 10-14 天之内挑选克隆。克隆细胞系可以在 TeSR™ 培养基中进行长期维持培养。

二、ArciTect™（产品号 #76002/76010/76016）

——使用 CRISPR-Cas9 系统进行 hPSCs 的基因编辑

CRISPR-Cas9 的易用性和多用途革新了 hPSC 的研究。这项技术的进步可以进行基因敲除，引入或修正特定突变，更好的了解发病机制和病理学中个体基因的作用。ArciTect™ 设计用于在 hPSCs 的基因编辑，提供适合您的快速、灵活和精准的基因编辑系统。从细胞培养、单细胞存活到实验设计、检测、验证基因编辑的效率，我们的试剂盒包括 hPSC 基因编辑每一步需要的试剂。优化和验证后的操作流程（www.stemcell.com 文档#27084）是特定设计用于和上游无缝衔接，ArciTect™ 降低了出现问题的概率，提高了实验成功率。

ArciTect™ 的优势

◆ 定制化。根据您的目的序列设计 crRNA。

◆ 灵活。不同的 Cas9 适合基因编辑的需要。

◆ 快速。无需转录和翻译。

◆ 降低脱靶率。RNP 复合物的及时降解，最大化降低可能的脱靶剪切。

图 1. 使用流式鉴定 ArciTect™ Cas9-eGFP
使用含有 ArciTect™ Cas9-eGFP 的 RNP 复合物对 WLS-1C（左）或 STiPS-M001（右）iPS 细胞进行转染，转染 24 小时后使用流式进行 eGFP 检测。填充柱状图：未转染对照；实线柱状图：Cas9-eGFP 转染的细胞。

图 2. 使用 ArciTect™ T7 核酸内切酶 I 进行 INDEL 检测
使用 ArciTect™ 人 HPRT 阳性对照试剂盒对 H1 ES 细胞或 WLS-1C iPS 细胞进行基因编辑，INDEL 形成（百分比 [%] 剪切效率）使用 ArciTect™ T7 核酸内切酶 I 试剂盒进行检测。对照：未转染细胞；检测：HPRT 编辑过的细胞。

编辑： z翟某某    来源：丁香园