GCBI 带你学测序系列：测序原理介绍
点击链接查看 课程视频>>
本次课程中，静静老师主要为大家分享了一代、二代测序的原理，今天小编这里主要为大家分享的是目前主流测序方法——二代测序。
作为最普遍的的测序平台 Illumina，其核心技术是：「DNA 簇」和「可逆性末端终止」，原理如下：将基因组 DNA 的随机片段附着到光学透明的玻璃表面（即 Flowcell），这些 DNA 片段经过延伸和桥式扩增后，在 Flow cell 上形成了数以亿计 Cluster，每个 Cluster 是具有数千份相同模板的单分子簇。然后利用带荧光基团的四种特殊脱氧核糖核苷酸，通过可逆性终止的边合成边测序技术对待测的模板 DNA 进行测序。
其测序流程主要分为以下四步：DNA 文库构建、Flowcell、桥式 PCR 扩增与变性、测序。
1、DNA 文库构建利用超声波把待测的 DNA 样本打断成小片段，主要是打断成 200-500bp 长的序列片段，并在这些小片段的两端添加上不同的接头，构建出单链 DNA 文库。
2、FlowcellFlowcell 是用于吸附流动 DNA 片段的槽道，当文库建好后，这些文库中的 DNA 在通过 flowcell 的时候会随机附着在 flowcell 表面的泳道上 
3、桥式 PCR 扩增与变性桥式 PCR 以 Flowcell 表面所固定的接头为模板，进行桥形扩增。经过不断的扩增和变性循环，最终每个 DNA 片段都将在各自的位置上集中成束，每一个束都含有单个 DNA 模板的很多分拷贝。
4、测序测序方法采用边合成边测序的方法。向反应体系中同时添加 DNA 聚合酶、接头引物和带有碱基特异荧光标记的 4 中 dNTP（如同 Sanger 测序法）。这些 dNTP 的 3』-OH 被化学方法所保护，因而每次只能添加一个 dNTP。在 dNTP 被添加到合成链上后，所有未使用的游离 dNTP 和 DNA 聚合酶会被洗脱掉。接着，再加入激发荧光所需的缓冲液，用激光激发荧光信号，并有光学设备完成荧光信号的记录，最后利用计算机分析将光学信号转化为测序碱基。这样荧光信号记录完成后，再加入化学试剂淬灭荧光信号并去除 dNTP 3』-OH 保护基团，以便能进行下一轮的测序反应。
当然了，静静老师讲的比这个丰富多了，至于具体的测序流程以及其他测序原理大家就去看视频吧！
每周四晚八点，GCBI 带你学测序系列课程在线直播，点击链接立即 报名听课>>
GCBI 周年庆活动正在进行，想要礼物的小伙伴赶紧 high 起来吧！ 