免疫荧光技术(immunofluorescence)
免疫荧光技术(immunofluorescence)将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出,从而可对抗原进行细胞定位。
免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物,再用这种荧光抗体(或抗原)作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素,利用荧光显微镜观察标本,荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光(黄绿色或桔红色),可以看见荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原或抗体的性质、定位,以及利用定量技术测定含量。
细胞成像
凯基提供国内品种最为齐全,价格最为优惠,也最有质量保证的可用于细胞成像的荧光探针与染料。
细胞骨架实验结果
产品列表:
货号 |
产品名称 |
规格 |
货号 |
产品名称 |
规格 |
KGMP003 |
细胞膜绿色荧光染料 DiO |
10mg |
KGMP0012 | 细胞骨架红色荧光探针ActinRed | 200μL |
KGMP002 |
细胞膜橙色荧光染料 DiI |
10mg |
KGMP0013 | 细胞骨架蓝色荧光探针ActinBlue | 200μL |
KGMP0025 |
细胞膜红色荧光染料 DiD |
10mg |
KGMP012-1 | 细胞质绿色荧光染料 Calcein, AM | 100μL |
KGMP0026 |
细胞膜紫色荧光染料 DiR |
5mg |
KGMP011 | 细胞质绿色荧光染料 CFDA, SE | 5mg |
KGMP001 |
细胞骨架绿色荧光探针ActinGreen |
200μL |
KGMP012-2 | 细胞质蓝色荧光染料 CMAC | 500μL |
ALAMAR BLUE
细胞增殖、细胞活力、细胞毒性
细胞活力是指总细胞群中活细胞所占的百分比,反映细胞群里生存情况。
细胞毒性是由细胞或者化学物质引起的单纯的细胞杀伤事件,不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。
细胞增殖是活细胞的重要生理功能之一,也是生物体的重要生命特征之一,是生物、发育、繁殖以及遗传的基础。
细胞增殖、活力以及细胞毒性研究广泛涉及到细胞生物学基础研究、药物研究及筛选等多种实验。
增殖、活力、毒性检测主流方法
一、传统方法是应用活细胞对台盼蓝特性鉴定出活细胞的比例以及3H-胸腺嘧啶核苷掺入法;
二、LDH酶法:通过检测细胞培养上清中LDH酶活性
(其它酶方法:如检测上清中碱性磷酸酶、酸性磷酸酶的活性等);
三、目前广泛使用的方法主要是MTT/MTS/XTT/CCK-8等,
操作原理:利用活细胞线粒体含有的多种脱氢酶可将电子供氢体还原成有色甲臜复合物(formazan),
而死细胞则无此功能,活细胞越多,颜色越深,标仪下测的OD值就越高;
四、通过直接测定进行分裂的细胞数来评价细胞的增殖能力(giemsa)。
AlamarBlue检测原理
主要采用氧化还原显色剂resazurin刃天青为原料。刃天青本身并没有荧光性,但一旦被具有代谢活性的细胞还原,则会转化生成一种强荧光产物(试卤灵)。
AlamarBlue是一种安全、稳定、易溶于水、且对细胞无毒的新型染料,可通过荧光产生或颜色变化指示细胞的代谢。
活细胞能够将蓝色的氧化形式AlamarBlue变成红色的还原形式,同时发生可量化的荧光变化,无活性的细胞不能还原AlamarBlue。
荧光的强度或红色的强度反映了细胞增殖的程度,其颜色变化可用酶标仪测定,由于氧化和还原的吸收光谱可形成重叠,需测定570nm(还原)和620nm(氧化)两个波长处的OD值,OD570减去OD620得到的吸收值即反映了试验中细胞增殖的相对水平[5];荧光变化可用荧光测定仪检测,激发波长530nm,散射波长590nm[1],使用荧光方法时具有更优秀的敏感性。
细胞增殖:Alamar Blue检测与MTT,CCK8的对比
产品(5mL) |
MTT |
CCK8 |
Alamar Blue |
价格(人民币) |
150 |
850 |
308 |
水溶性 |
不溶于水 |
可溶于水 |
可溶于水 |
细胞毒性 |
高 |
低 |
无 |
抗干扰能力 |
强 |
弱 |
强 |
灵敏度 |
- |
- |
100 cells/well |
计算方法(荧光读数法)
对于细胞增殖或细胞毒性的检测,待测化合物的活性可计算为细胞数量的变化百分比,计算方法如下:
活性(%) 或细胞活性 (%) = 100 X (FCMPD - FO) / (FCTRL - FO)
FCMPD和 FCTRL分别是加入和未加入待测化合物时的平均荧光强度,FO是空白对照品的平均荧光强度。
对于剂量反应研究,可绘制检测数据与化合物浓度的曲线。也可采用PRISM或其他数据分析工具通过非线性回归分析确定EC50(细胞增殖检测)和IC50(细胞毒性检测)。
P388细胞(OD读数) A549细胞(荧光读数)
EB终结者-GelGreen&GelRed
溴化乙锭(EB)介绍
溴化乙锭一种高度灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号。任何一个分子生物学实验室都需要大量使用EB。
为什么要开发EB终结者——EB的危害
EB可以嵌入人细胞DNA碱基分子中,导致错配。因此是强诱变剂,具有高致癌性。
EB的净化及处理十分麻烦:
(1)EB溶液根据浓度使用活性炭或化学法(强酸碱等)处理。
(2)EB接触物需要在生物危害柜中焚烧。
EB终结者相对于传统EB的优势
EB终结者是次世代的核酸荧光检测物,作为一种新型荧光染色剂EB终结者不会进入活细胞。
该化合物无法穿透细胞膜。不具有细胞膜透性单、双链核酸,RNA/DNA同时结合,常温稳定,操作检测,灵敏度可与EB同级。安全,无毒性,无致癌性(Ames实验证明)。
对环境无害不需要特殊的处理方法,可以倾倒在水池或者垃圾桶中。
EB终结者光谱特性:
EB终结者Red光谱特性 |
EB终结者Green光谱特性 |
Excitation (blue) and emission spectra (red) of EB终结者Red bound to dsDNA in TBE buffer. EB终结者Red Dye Ex/Em: 535/615 nm, bound to nucleic acid. |
Excitation (blue) and emission spectra (red) of EB终结Green bound to dsDNA in TBE buffer. EB终结者Green Dye Ex/Em: 500/530 nm, bound to nucleic acid |
凯基产品:
货号 |
产品名称 |
规格 |
货号 | 产品名称 |
规格 |
KGM025G |
EB终结者GelGreen 10,000X |
100μL |
KGM023G | EB终结者GelGreen Loading Buffer (6X) | 200μL |
KGM025R |
EB终结者GelRed 10,000X |
100μL |
KGM023R | EB终结者GelRed Loading Buffer (6X) | 200μL |
荧光标记二抗
荧光检测:经由光源激发,吸收特定波长的能量,而由光电倍增管侦测放大所发射的光。
荧光标记:经由激发,吸收特定波长的能量,然后再发射更长波长的光。
荧光探针:一般是由外在的荧光标记(小分子、蛋白质或量子点)与小分子药物、蛋白质、核酸、脂类或其它碳水化合物经分子共价结合而形成。
荧光指标:在溶液中荧光属性随着氢离子浓度、氧化电势或金属离子浓度变化而受到影响的物质,可被用为荧光指标。
简介:
全波长荧光素标记(keyFlour350-750);百种荧光二抗覆盖常用种属(羊、兔、人、大/小鼠);可应用于FC,IF等。
选择凯基荧光标记二抗,意味着:充足现货、高性价比、后勤支持,产品列表如下:
货号 | 产品名称 | 规格 |
KGAB007 | Key Fluor 350 标记山羊抗人 IgG (H+L) | 100μL |
KGAB008 | Key Fluor 350标记山羊抗小鼠IgG (H+L) | 100μL |
KGAB009 | Key Fluor 350标记山羊抗兔IgG (H+L) | 100μL |
KGAB010 | Key Fluor 488标记山羊抗兔IgG (H+L) | 100μL |
KGAB011 | Key Fluor 488标记山羊抗小鼠IgG (H+L) | 100μL |
KGAB430M | Key Fluor 430 标记山羊抗小鼠 IgG (H+L) | 50μL |
KGAB430R | Key Fluor 430 标记山羊抗兔 IgG (H+L) | 50μL |
查看更多产品 http://keygentec.biomart.cn/news/107481.htm
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南京凯基生物科技发展有限公司位于南京江宁紫金方山科学创新园,是一家专业从事生物试剂研发、生产、销售和技术服务的国有公司。
凯基科研产品菜单涵盖生命科学研究常用试剂,多达五千余种,上万种品种规格。