导读
质粒DNA转化大肠杆菌是分子生物学研究中最常规的方法之一。体外重组DNA分子必须导入适当的受体细胞进行繁殖，才能获得大量的阳性重组子克隆和(或)表达目的基因产物。质粒转化的方法主要有化学法和电穿孔法。电转化法转化效率高，每μgDNA可得到109～1010个转化体，但要求一套特殊的仪器。最常用的化学法是用CaCl2处理受体菌，使之成为感受态细胞，即具备接受外源DNA的能力。本期就让我们来学习了解怎么搞定感受态细胞的制作。关注生物学霸微信号：shegnwuxueba，在微信上也可以查实验，找抗体哦。
什么是感受态细胞
在自然条件下，很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内，但在人工构建的质粒载体中，一般缺乏此种转移所必需的mob基因，因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。
转化(Transformation)是将外源DNA分子引入受体细胞，使之获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术。
转化过程所用的受体细胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体(Rˉ，Mˉ)，它可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定 地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法(如电击法，CaCl2 ，RbCl(KCl)等化学试剂法)的处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞(Compenent cells)。进入受体细胞的DNA分子通过复制.....
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感受态细胞CaCl2制备法
原理：
当细胞置于非常高的电场中，细胞膜就变得具有通透性，能让外界的分子扩散进细胞内，这一现象称为电穿孔。运用这一技术，许多物质，包括DNA、RNA、蛋白质、药物、抗体和荧光探针都能载入细胞。作为一种基因转导方法，电穿孔已被广泛用于各种细胞类型，包括细菌、酵母、植物和动物细胞；而且，它还能作为注射方法（称为电注射），把各种外源物质引入活细胞。与其他常用的导入外源物质的方法相比，电穿孔具有很多优点。首先，不必象显微注射那样使用玻璃针，不需要技术培训和昂贵的设备，可以一次对成百万的细胞进行注射。第二，与用化学物质相比，电穿孔几乎没有生物或化学副作用。第三，因为电穿孔是一种物理方法，较少依赖细胞类型，因而应用广泛。实际上，对大多数细胞类型，用电穿孔法基因的转移效率比化学方法高得多。
【仪器、材料和试剂】
1、配制0.05mol/L CaCl2 -15%甘油混合溶液，高温高压灭菌；
注：CaCl2 必须为分析纯以上。
2、实验中所需的所有试管、培养瓶、离心管等均要用去离子水彻底清洗干净，高温...
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电穿孔法
原理：
当细胞置于非常高的电场中，细胞膜就变得具有通透性，能让外界的分子扩散进细胞内，这一现象称为电穿孔。运用这一技术，许多物质，包括DNA、RNA、蛋白质、药物、抗体和荧光探针都能载入细胞。作为一种基因转导方法，电穿孔已被广泛用于各种细胞类型，包括细菌、酵母、植物和动物细胞；而且，它还能作为注射方法（称为电注射），把各种外源物质引入活细胞。与其他常用的导入外源物质的方法相比，电穿孔具有很多优点。首先，不必象显微注射那样使用玻璃针，不需要技术培训和昂贵的设备，可以一次对成百万的细胞进行注射。第二，与用化学物质相比，电穿孔几乎没有生物或化学副作用。第三，因为电穿孔是一种物理方法，较少依赖细胞类型，因而应用广泛。实际上，对大多数细胞类型，用电穿孔法基因的转移效率比化学方法高得多。
【仪器、材料和试剂】
1、仪器：脉冲发生器；样品池（一个盛细胞的容器和两个平行的金属电极）；CO2培养箱，显微镜；离心机，微量移液器，镊子，剪刀，手术刀片，三角瓶，吸管，毛细管，离心管，载玻片，盖玻片，NALGEN一次性滤器.
2、材料：外源DNA，对数生长中期细胞
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