质粒提取过程为什么要去除内毒素?
做细胞转染试验时,内毒素会降低转染的效率,甚至导致转染实验的失败,因此,提取质粒时需要去除内毒素。
内毒素是什么?
内毒素是磷脂-多糖-蛋白质复合物,主要成分是脂多糖。是细胞壁的外层成分,覆盖在坚忍细胞壁的粘肽上。是革兰氏阴性(如大肠杆菌,E.coli)胞膜上一种成分。细菌外膜的外部脂质成分完全由内毒素分子组成。一个 E.coli 包含约 2 百万个 LPS 分子,每个 LPS 分子又由疏水性的脂质 A、复杂的多糖链以及带负电荷的磷酸基团组成。因此每个内毒素既包含疏水区域也包含了亲水和带电区域,从而赋予其与其它分子相互作用的独特性质。细菌在其活跃生长时表面的内毒素成分较少,而一旦其死亡则会释放大量内毒素。在质粒提取的裂解过程中,内毒素会从细菌的外膜释放到裂解液中。
内毒素性质稳定、耐热,在 100 ℃ 的高温下加热 1 小时也不会被破坏,只有在 160 ℃ 的温度下加热 2~4 小时,或者强碱、强酸、强氧化剂加温煮沸 30 分钟才能破坏它的生物活性。故,质粒提取过程中去除内毒素成为一个难题?
博日科技现推出新款 Biospin 无内毒素质粒 DNA 中量/大量快速提取试剂盒助力无内毒素质粒的提取。单次最大样本处理量高达 200 ml,提取的质粒内毒素残留低至<0.1 EU/μg。
产品特点:
1. 操作简便
(1)无需柱平衡预处理
(2)无需冰浴
(3)无需热孵育
2. 设备简单,仅需离心机即可
3. 试剂安全无毒
4. 高得率,高纯度,内毒素去除干净
实验结果
1. 用提取到的 pCMV 质粒转染对内毒素敏感 VERO 细胞的图片(荧光视野)
A:Biospin 质粒 DNA 中量提取试剂盒 | B:Biospin 无内毒素质粒 DNA 中量快速提取试剂盒 | C:国外某知名厂家无内毒素质粒 DNA 中量提取试剂盒 |
结论:同时用提取到的 pCMV 质粒对内毒素敏感 VERO 细胞进行转染,相比博日 Biospin 普通的质粒 DNA 中量提取试剂盒,Biospin 无内毒素质粒 DNA 中量快速提取试剂盒可以保证更高的细胞存活率,与国外某知名厂家无内毒素质粒 DNA 中量提取试剂盒的水平一致,但操作简便很多。
2. 用提取到的 pCMV 质粒转染对内毒素敏感 VERO 细胞的图片(荧光视野):
(a) Biospin 无内毒素质粒 DNA 大量快速提取试剂盒 | (b) 国外某知名厂家无内毒素质粒 DNA 大量提取试剂盒 |
结论:同时用提取到的 pCMV 质粒对内毒素敏感 VERO 细胞进行转染,博日 Biospin 无内毒素质粒 DNA 大量快速提取试剂盒可以保证较高的细胞存活率,与国外某知名厂家无内毒素质粒 DNA 大量提取试剂盒的水平一致,但操作简便很多。
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