HighGene 简介
HighGene 转染试剂是一种新型高效的阳离子聚合物。它可以与核酸(包括质粒、siRNA、寡聚核苷酸)相互作用形成一种复合物将核酸转运到真核细胞内,适用于大部分真核细胞的细胞转染。
HighGene 优势
(1) 转染效率较高,ABclonal 选取多种常见细胞系(包括 HEK293T、HCT116、HeLa、A549、C6、HEK293F 等),分别使用 HighGene 转染试剂和市面常规转染试剂产品进行细胞转染,实验结果如图 1 所示。
图 1:HighGene 转染试剂具有较高的转染效率。在 6 孔细胞板中分别接种 293T、HCT116、C6 三种细胞,细胞密度为 60% 左右,分别使用 HighGene 转染试剂和两种市面同类产品进行细胞转染,GFP 真核表达质粒用量均为 2 μg,细胞转染 48 小时后,在荧光显微镜下观察并拍照。
(2) 性质稳定,实验重复性好,ABclonal 选取 HeLa 细胞系,分别铺置三个复孔,使用 HighGene 转染试剂进行细胞转染,实验结果如图 2 所示。
图 2:HighGene 转染试剂实验重复性高度一致。在 6 孔细胞板中接种 HeLa 细胞,细胞密度为 60% 左右,使用 HighGene 转染试剂进行细胞转染,GFP 真核表达质粒用量为 2 μg,细胞转染 48 小时后,在荧光显微镜下观察并拍照。
(3) 对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用,HighGene 转染试剂除了适用于贴壁细胞外,对于悬浮细胞也有较好的转染效果。ABclonal 选取 293F 悬浮细胞系进行了测试,实验结果如图 3 所示。
图 3:HighGene 转染试剂适用于 HEK293F 悬浮细胞的转染。在 125 mL 摇瓶中接种 30 mL 密度为 1 x106 HEK293F 悬浮细胞,使用 HighGene 转染试剂进行细胞转染,GFP 真核表达质粒用量为 30 μg,细胞转染 48 小时后,在荧光显微镜下观察并拍照。
(4) 无明显细胞毒性,细胞转染后,48 小时内无需更换细胞培养液。ABclonal 选取 293T 细胞进行细胞转染后,不更换细胞培养液,连续培养两天,并拍照记录细胞生长状态及转染效果,实验结果如图 4 所示。
图 4:HighGene 转染试剂对细胞无明显毒性。在 6 孔细胞板中接种 293T 细胞,细胞密度为 60% 左右,使用 HighGene 转染试剂进行细胞转染,GFP 真核表达质粒用量为 2 μg,细胞转染 24、48、72 小时后,在荧光显微镜下观察并拍照。
储存条件
2-8℃ 储存,保质期两年,避免反复冻融。
HighGene 使用说明
贴壁细胞转染(以 HEK293T 细胞为例)
1. 第一天,将 HEK293T 细胞接种到 24 孔板中,细胞密度控制在 50%-70% 为宜;
(注:根据实验需求,可以选择不同的细胞培养装置,细胞接种数量和所需培养液体积详见附表 1)
2. 第二天,取 1 μg 质粒加入到盛有 50μL 无血清 DMEM 基础培养基离心管中,标记为 A 液;取 2μL HighGene 转染试剂加入到另一个盛有 50μL 无血清 DMEM 基础培养基离心管中,标记为 B 液;
(注: MEM、1640、F12 等基础培养基均可用于 HighGene 转染试剂的溶剂,不同的细胞培养装置所需质粒的量和 HighGene 转染试剂剂量详见附表 2)
3. 将 50μL 含有 HighGene 转染试剂 B 液滴加到 50μL 含有质粒 A 液中,用移液枪轻轻吹打几次混匀,室温静置 15-20 分钟;
4. 将 100μL HighGene 转染试剂/质粒复合物均匀滴加到 24 孔细胞培养板孔中,轻轻摇动细胞培养板使其均匀分布;
5. 细胞转染 4-6 小时后,更换新鲜完全培养基(可选!);
6. 细胞转染 24-48 小时后,即可使用适当方式进行检测,如 RT-PCR、Western、ELISA、报告基因等,或加入相应筛选药物(G418 或 Puromycin)获得稳定细胞株。
悬浮细胞转染(以 HEK293F 细胞为例)
1. 第一天,将 HEK293F 细胞接种 30 mL 细胞悬液到 125 mL 摇瓶中,细胞密度控制在(1.0-1.5)×106 为宜;
2. 第二天,取 30 μg 质粒加入到盛有 1.5 mL DMEM 基础培养基离心管中,标记为 A 液;取 60μL HighGene 转染试剂加入到另一个盛有 1.5 mL DMEM 基础培养基离心管中,标记为 B 液;
3. 将 1.5 mL 含有 HighGene 转染试剂 B 液滴加到 1.5 mL 含有质粒 A 溶中,用移液枪轻轻吹打几次混匀,室温静置 15-20 分钟;
4. 将 3 mL HighGene 转染试剂/质粒复合物均匀滴加到盛有 30 mL HEK293F 悬浮细胞的 125 mL 摇瓶中,轻轻摇动摇瓶使其混合均匀;
5. 细胞转染 5 天后,根据蛋白表达的情况(胞内表达或分泌表达),收集细胞或细胞培养上清,进行后续蛋白纯化操作。
注意事项
1. 转染前细胞应处于良好的生长状态(对数生长期为佳),推荐细胞传代后 12-24 小时内、细胞密度为 60-70% 时进行转染;
2. 使用高质量的质粒有利于获得较高的转染效率,推荐使用无内毒素质粒抽提试剂盒抽提质粒;
3. 在配制转染试剂与质粒复合物时,需使用无血清、无抗生素的基础培养基作为溶剂;
4. 在细胞转染实验中,根据细胞转染效率可适当调整质粒与转染试剂的用量比例,一般质粒的量(μg)与 HighGene 转染试剂剂量(μL)使用比例在 1:1-1:4 之间,推荐比例为 1:2;
5. 本产品仅限用于科学研究,不得用于临床诊断和治疗。
* 附表 1 常用细胞培养装置转染前一天细胞接种的推荐数量和培养体积
细胞培养装置 | 接种细胞数量 | 细胞培养液体积 |
96 孔板 | (1-3)x104 | 0.1-0.2 mL |
24 孔板 | (1-3)x105 | 0.5-1 mL |
12 孔板 | (2-4)x105 | 1-2 mL |
6 孔板 | (3-5)x105 | 2-3 mL |
60 mm 培养皿 | (5-10)x105 | 3-5 mL |
100 mm 培养皿 | (1-3)x106 | 8-10 mL |
125 ml 摇瓶 | (1.5-2.5)x107 | 30-35 mL |
500 ml 摇瓶 | (6-10)x107 | 120-140 mL |
1000 ml 摇瓶 | (1.2-2)x108 | 240-280 mL |
* 附表 2 常用细胞培养装置细胞转染时,各组分推荐使用剂量
细胞培养装置 | 质粒 (μg) | 质粒溶剂 (μL) | HighGene 转染试剂 (μL) | HighGene 转染试剂溶剂(μL) | 复合物溶液(μL) |
96 孔板 | 0.2 | 10 | 0.4 | 10 | 20 |
24 孔板 | 1 | 25 | 2 | 25 | 50 |
12 孔板 | 2 | 50 | 4 | 50 | 100 |
6 孔板 | 2-4 | 100 | 4-8 | 100 | 200 |
60 mm 培养皿 | 3-5 | 200 | 6-10 | 200 | 400 |
100 mm 培养皿 | 5-10 | 500 | 10-20 | 500 | 1000 |
125 mL 摇瓶 | 30-35 | 1500 | 60-70 | 1500 | 3000 |
500 mL 摇瓶 | 120-140 | 6000 | 240-280 | 6000 | 12000 |
1000 mL 摇瓶 | 240-280 | 12000 | 480-560 | 12000 | 24000 |
* 附表 3 常用细胞培养装置细胞转染时,siRNA 各组分推荐使用剂量
细胞培养装置 | siRNA(pmol) | siRNA 溶液(μl) | 转染试剂(μl) | 转染试剂溶液(μl) | 复合物溶液(μl) |
96 孔板 | 4 | 10 | 0.2 | 10 | 20 |
24 孔板 | 20 | 25 | 1 | 25 | 50 |
12 孔板 | 40 | 50 | 2 | 50 | 100 |
6 孔板 | 100 | 100 | 5 | 100 | 200 |
60 mm 培养皿 | 200 | 200 | 10 | 200 | 400 |
100 mm 培养皿 | 600 | 500 | 30 | 500 | 1000 |
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公司简介
武汉爱博泰克生物科技有限公司依托 ABclonal 美国波士顿抗体与蛋白研发中心、中国光谷生物城 (武汉) 抗体生产基地以及上海张江分子酶研发中心,凝聚了十余位全球知名分子和免疫学方面博士,致力于抗体与蛋白技术的研究。详情 >
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