脂类物质(LIPIDS)是一类脂溶性(疏水性)的自然分子,分为简单脂质包括脂肪酸(FATTY ACID)及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂;复合脂质包括磷脂、糖脂、硫脂以及脂蛋白;和中性脂质包括甘油、固醇类(STEROL)物质,例如胆固醇。脂类物质在机体中具有能量储存的作用,是膜结构的组成成分和细胞信号分子。尼罗红染色剂(9-diethylamino-5H-benzo[alpha]-phenoxazine-5-one;Nile red)是一种亲脂性的恶嗪类荧光染料。与极性脂类物质,例如磷脂结合后,在特定激发波长543nm的激发下,显示强烈桔红色荧光(散发波长598nm)。其分子式为C20H18N2O2,分子量为318。
产品内容
HEPENGBIO清理液(Reagent A) 毫升 HEPENGBIO固着液(Reagent B) 毫升 HEPENGBIO染色液(Reagent C) 微升 HEPENGBIO稀释液(Reagent D) 毫升 产品说明书 1份
保存方式
保存HEPENGBIO染色液(Reagent C)在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里;有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管:用于反应液配制和样品操作的容器 微型台式离心机:用于悬浮细胞的操作 荧光显微镜:用于细胞染色后观察分析
实验步骤
实验开始前,将试剂盒里的HEPENGBIO染色液(Reagent C)冻融,然后移出xx毫升HEPENGBIO稀释液(Reagent D)到1.5毫升离心管,加入xx微升HEPENGBIO染色液(Reagent C),混匀后,置入冰槽里,标记为HEPENGBIO染色工作液,避免光照。然后进行下列操作。
操作一:细胞载玻片染色
- 取出待测的细胞载玻片
- 小心加上xx微升HEPENGBIO清理液(Reagent A)在载玻片上,铺满整个样品表面
- 小心移去载玻片上的HEPENGBIO清理液(Reagent A)
- 小心加上xx微升HEPENGBIO固着液(Reagent B),铺满整个样品表面
- 室温下,孵育5分钟
- 小心移去载玻片上的HEPENGBIO固着液(Reagent B)
- 小心加上xx微升HEPENGBIO清理液(Reagent A),清洗样品表面
- 小心移去载玻片上的HEPENGBIO清理液(Reagent A)
- 小心加上xx微升HEPENGBIO染色工作液,铺满整个载玻片样品表面
- 室温下孵育10分钟,避免光照
- 放上盖玻片
- 即刻在荧光显微镜下观察:激发波长543nnm,散发波长598nm(磷脂类物质呈现桔红色)
操作二:24孔细胞培养板染色
- 小心抽去24孔细胞培养板里的培养液
- 小心加入xx微升HEPENGBIO清理液(Reagent A),清洗生长中的细胞表面
- 小心抽去HEPENGBIO清理液(Reagent A)
- 小心加入xx微升HEPENGBIO固着液(Reagent B),覆盖整个生长表面
- 在室温下孵育5分钟
- 小心抽去HEPENGBIO固着液(Reagent B)
- 小心加入xx微升HEPENGBIO清理液(Reagent A),清洗细胞表面
- 小心抽去HEPENGBIO清理液(Reagent A)
- 小心加入xx微升HEPENGBIO染色工作液,覆盖整个生长表面
- 室温下静孵育10分钟,避免光照
- 即刻在荧光显微镜下观察:激发波长543nnm,散发波长598nm(磷脂类物质呈现桔红色)
操作三:悬浮细胞或脱离细胞染色
- 将悬浮细胞或脱离细胞(1 X 106细胞)移入到1.5毫升离心管
- 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为300g(或2000RPM,例如eppendorf 5415)
- 小心抽去上清液
- 加入xx微升HEPENGBIO清理液(Reagent A),混匀细胞颗粒群
- 放进微型台式离心机离心1分钟,速度为300g(或2000RPM,例如eppendorf 5415)
- 小心抽去上清液
- 加入xx微升HEPENGBIO染色工作液,混匀细胞颗粒群
- 室温下孵育10分钟,避免光照
- 移出50微升到载玻片上,放上盖玻片
- 即刻在荧光显微镜下进行观察:激发波长543nnm,散发波长598nm(磷脂类物质呈现桔红色)
注意事项
- 本产品为50次(细胞载玻片)和25次(1个24孔板)操作
- 操作时,须戴手套
- 所有操作在室温下进行
- 本产品适合各种规格的培养细胞:载玻片,载玻片培养皿,35mm培养皿,和各种培养孔板,须相应调整处理液:
操作容器 |
建议操作体系 |
载玻片 |
200微升 |
载玻片培养皿 |
1毫升 |
35mm培养皿 |
1毫升 |
96孔培养板 |
100微升 |
48孔培养板 |
200微升 |
24孔培养板 |
400微升 |
12孔培养板 |
1毫升 |
6孔培养板 |
2毫升 |
25cm2细胞培养瓶 |
3毫升 |
- HEPENGBIO染色工作液新鲜配制,即刻使用,不宜保存
- HEPENGBIO染色液(Reagent C)的工作液使用比例:1毫升体系可以使用10微升(1:100容量比)
- 每次更换试剂溶液时,保持样品表面基本晾干。空气中晾干状态为没有水滴,呈湿润状态,可见反光
- 试剂溶液在样品表面时,避免有气泡存在,同时确保铺满细胞表面
- 如果用户没有匹配的滤波器,可以使用515至560nm之间的任一激发波长和590至610nm之间的任一散发波长
- 染色完成后,即刻进行荧光显微镜观察
- 本公司提供系列脂类染色试剂产品
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