PARPtrap PARP2检测试剂盒：现货促销，速来锁定库存

在肿瘤治疗领域，PARP抑制剂已取得显著成功，其作用机制不仅在于抑制PARP酶的催化活性，更关键的是将PARP蛋白“捕获”在DNA损伤位点，形成致命的PARP-DNA复合物，导致癌细胞死亡。然而，第一代PARP抑制剂主要靶向PARP1，对PARP2的选择性及捕获效应研究相对不足。随着研究发现PARP2在前列腺癌等恶性肿瘤中过表达，并通过FOXA1/AR通路参与疾病进展，开发能够特异性诱导PARP2-DNA捕获的小分子抑制剂成为新的药物发现方向。

由艾美捷代理的BPS Bioscience推出的PARPtrap Assay Kit for PARP2（货号：78296），正是为高通量筛选和表征PARP2捕获型抑制剂而设计的完整解决方案。该试剂盒采用荧光偏振（Fluorescence Polarization, FP）技术，在均相体系中实时检测PARP2与DNA的结合状态，可快速评估化合物促进PARP2-DNA复合物形成的能力。以下从检测原理、试剂盒组分、应用场景及操作要点等方面进行详细介绍。

图1：测定原理。

SARM1的水解酶活性是通过监测Etheno-NAD水解形成Etheno-ADPR+烟酰胺的过程来测量的。由于内部猝灭作用，Etheno-NAD本身不具有荧光性。当被SARM1水解时，烟酰胺被释放出来，导致荧光信号增强，且荧光信号的增强与酶活性直接成正比。

 

一、检测原理：荧光偏振法监测PARP2-DNA相互作用

荧光偏振技术基于小分子在溶液中的旋转速度与其分子量之间的关系。当荧光标记的小分子（如寡核苷酸探针）处于自由状态时，旋转速度快，发射光偏振程度低；当该分子与较大的蛋白质（如PARP2）结合后，复合物旋转速度减慢，发射光偏振程度显著升高。

本试剂盒的核心设计如下：

1. 荧光标记的DNA双链探针：提供一条末端带有荧光基团（如FAM）的双链寡核苷酸，模拟DNA损伤位点的结构。

2. 重组人源PARP2酶（氨基酸2-583）：包含完整的DNA结合域及催化域，具有NAD⁺依赖性自身核糖基化活性。

3. NAD⁺：作为PARP2的底物，在未添加抑制剂时，PARP2结合DNA后会发生自身PARylation，负电荷积累导致其从DNA上解离。

4. 待测化合物：若化合物具有“捕获”功能，则会阻止PARP2从DNA上解离，使其稳定结合在DNA探针上。

检测流程：将PARP2酶、荧光DNA探针、NAD⁺及待测化合物混合孵育。在无捕获剂时，PARP2结合DNA后迅速发生自身修饰并解离，荧光偏振值较低；在存在捕获型抑制剂时，PARP2被锁定在DNA上，形成高分子量复合物，荧光偏振值显著升高。通过测定偏振值（mP）的变化，即可量化化合物的捕获活性。

 

二、试剂盒组分与规格

该试剂盒提供两种规格：96孔板形式（100次反应）和384孔板形式（400次反应），每个试剂盒包含：

重组人PARP2酶（2-583氨基酸，纯度及活性经质控验证）

荧光标记的寡核苷酸双链（避光保存）

NAD⁺（需按说明溶解使用）

PARPtrap 检测缓冲液（优化了离子强度及pH，确保最佳结合效率）

详细操作说明书

所有组分在收货后按指示存储（通常为-80°C），自收货之日起6个月内保持最佳性能。荧光探针对光敏感，建议分装后避光保存，避免反复冻融。

 

三、核心应用场景

本试剂盒主要面向两大药物发现需求：

1. 高通量筛选（HTS）促进PARP2-DNA捕获的小分子

传统的PARP酶活性抑制试验仅能反映化合物对催化活性的抑制，无法区分“催化抑制”与“DNA捕获”两种机制。而PARPtrap试剂盒直接检测PARP2-DNA复合物的稳定性，可精准识别能够增强而非破坏该复合物的化合物。这对于开发具有更强细胞毒性效应的下一代PARP抑制剂（如PARP2选择性捕获剂）至关重要。试剂盒兼容自动化移液工作站，384孔板格式支持每天数千个化合物的筛选。

2. 先导化合物的IC₅₀测定及机制表征

对于筛选出的阳性化合物，可进一步进行剂量-响应曲线分析，计算其促进PARP2-DNA捕获的半效浓度（EC₅₀）或IC₅₀。由于荧光偏振读数稳定、Z'因子高，该方法能够可靠区分不同化合物之间的效力差异。研究者还可以通过改变NAD⁺浓度或DNA序列，探究化合物的作用模式（如是否与DNA结合位点竞争）。

 

四、实验流程简要说明

1. 试剂准备：将PARP2酶、荧光DNA探针、NAD⁺及检测缓冲液置于冰上解冻，避光保存荧光探针。准备待测化合物（建议使用DMSO溶解，并设置浓度梯度）。

2. 反应体系构建（384孔板推荐方案）：每孔加入10 uL检测缓冲液，随后加入2 uL PARP2酶（终浓度优化范围为10–100 nM），2 uL荧光DNA探针（终浓度5–20 nM），2 uL NAD⁺（终浓度100 uM），以及2 uL待测化合物或DMSO对照。总体积调整至20 uL。

3. 孵育与读数：室温避光孵育30–60分钟。使用荧光偏振酶标仪，激发波长485 nm，发射波长535 nm，分别测量平行偏振（S）和垂直偏振（P）信号，计算偏振值mP = 1000 × (S - G×P)/(S + G×P)，其中G为仪器校正因子。

4. 数据分析：将化合物孔的mP值与阴性对照（无化合物，PARP2正常解离）及阳性对照（使用已知捕获型抑制剂，如奥拉帕尼或特定PARP2工具化合物）进行比较。捕获活性% = (mP_compound - mP_min) / (mP_max - mP_min) × 100%，绘制剂量-响应曲线拟合EC_50。

 

五、注意事项与配套建议

物种特异性：试剂盒提供人源PARP2重组蛋白，其DNA结合域与啮齿类动物同源性较高，但跨物种验证需用户自行评估。

阳性对照：首次使用建议运行已知的PARP捕获剂（如talazoparib，虽主要靶向PARP1但对PARP2也有一定捕获效应），以确认体系性能。

背景控制：无PARP2酶的孔作为空白对照，测定荧光探针的基础偏振值。NAD⁺缺失的孔可反映最大结合信号（因无自身修饰解离）。

辅助设备：需要具备荧光偏振检测模块的多模式酶标仪，以及黑色、低自发荧光的384孔板。

干扰排除：某些化合物自身可能具有荧光或淬灭效应，建议设置“化合物+荧光探针（无酶）”对照孔，排除假阳性。

 

六、文献参考

Murai J., et al., 2014 Molecular Cancer Therapeutics 13: 433-443

Murai J., et. al., 2012 Cancer Research 72: 5588-5599

Zandarashvili L., et al., 2020 Science 368(6486): 6367

Marques M., et al., 2019 Oncogene 38 (12): 2177-2191.