胎牛血清≠全部需要 56℃灭活 30min

胎牛血清是细胞的 “一日三餐”，从实验室传承下来的经典操作 ——56℃水浴 30 分钟热灭活，曾是绝大多数人的标配步骤。

可随着血清生产工艺迭代升级、原料筛选标准提升，这套操作早已不再适用所有细胞，盲目灭活反倒成为细胞长势差、实验重复不稳的隐形隐患。

一、血清热灭活，最初是为了解决什么？

热灭活的核心目的：高温灭活血清中的补体成分。

早年血清提纯工艺简陋，血清内补体含量偏高，补体激活后会损伤细胞膜，造成免疫类细胞裂解、抱团死亡。在没有精细化筛选血清的年代，56℃、30min 灭活是降低补体毒性最简单有效的手段。

现如今商品化胎牛血清经过多层过滤、原料筛选、理化质控，出厂补体含量已被严格管控，合格胎牛血清自带的补体水平，不足以损伤常规永生细胞，灭活也就从「必做项」变成「可选项目」。

二、90% 常规细胞，不建议血清灭活（重点）

常用肿瘤细胞系、293、CHO、3T3-L1、Vero、上皮细胞等永生细胞，胎牛血清直接添加使用即可，严禁多余灭活，高温弊端一目了然：

1. 损耗活性营养，细胞越长越慢

56℃高温会破坏血清内生长因子、黏附蛋白、激素类活性物质，血清促增殖、促贴壁能力大打折扣，出现细胞贴壁松散、传代后生长迟缓、增殖周期拉长。

2. 血清产生絮状沉淀

脂蛋白受热变性析出白色沉淀，沉淀悬浮在培养基中，既消耗营养，还容易被误判为微生物污染，白白浪费实验样本。

 

血清沉淀图

 

三、如需灭活，标准操作指南，减少血清损耗

一些特殊的细胞，如免疫细胞，推荐使用热灭活的胎牛血清。

以下是热灭活的操作步骤：

1. 血清提前 2～8℃低温过夜融化，严禁室温久放、开水快速融冻；

2. 水浴锅精准稳定 56℃，水浴液面高于血清液面，计时 30min，每 10min 轻柔颠倒混匀一次，防止局部过热变性；

3. 灭活完毕室温冷却，无菌分装，短期 4℃避光储存，剩余分装 - 20℃冻存，避免反复冻融。

 

操作步骤图

四、总结

不做无用的热灭活，既能节约实验时间、降低污染风险，还能较大程度保留血清营养价值，让细胞长势稳定，实验数据重复性更高。

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