免疫亲和柱使用、保存问题分析

免疫亲和柱使用、保存问题分析

1、运输与保存：

免疫亲和柱长期应于4-8℃保存，严禁冷冻，有效期为1年（过期后不建议使用；已冻结后化冻的柱子不建议使用）。运输温度为4℃-30℃，冬季运输至较寒冷地区，建议使用厚泡沫盒，并用室温保存的冰袋包裹产品保温；夏季气温较高时，建议使用厚泡沫盒，并用-20度左右冻结的冰袋包裹产品保温。

2、实验温度：

抗原抗体发生反应的最佳温度是在25℃左右，所以实验需要的环境温度最好是室温25℃左右，过高或过低都会对抗原抗体结合产生影响，从而影响免疫亲和柱的回收率等参数。免疫亲和柱从4-8℃环境下取出后，需要恢复至室温在进行实验。

3、质量检测：

本公司对每批次的免疫亲和柱都会进行严格的质量检测，检测合格方能出库，包括载量满足各品种国标要求、回收率至少大于85%等。

4、回收率问题：

部分客户测定添加回收率较低，我们做以下原因分析，免疫亲和柱的原理是将对应毒素的单克隆抗体偶联在柱子上，当含有对应毒素的样品经过柱子时，对应毒素会吸附在柱子上，后经洗脱，收集毒素。所以导致回收率低主要从以下几点进行分析：

（1）样品提取是否充分、有效：样品的提取要充分，并且注意临用现提取（例如黄曲霉毒素是不稳定的，需要临用现配，避光保存），称量，配制，操作准确。

（2）抗原抗体结合方面：上样、淋洗、洗脱流速一定控制好，不能太快，否则还没充分反应，液体就已经留出去了。流速控制在1-2滴/秒(某些回收率较低客户可以使用1滴/秒)较为合适。

（3）洗脱方面：充分洗脱步骤方法①准确加入1ml甲醇后，保留30-60秒，使甲醇与柱子充分反应后，打开下端口，调节流速1-2滴/秒，收集全部洗脱液。方法②两部洗脱，先使用0.5ml甲醇洗脱，静置30-60秒，然后再加入1ml甲醇洗脱，保留30-60秒，使甲醇与柱子充分反应后，打开下端口，调节流速1-2滴/秒，收集全部洗脱液。

（4）操作规范：各步骤操作需规范，称量配制需精准。

（5）空白加标准品，测定添加回收率：这种测定添加回收率的方法，一般问题较少，只要标准品临用现配，称量配制准确，吹干步骤多注意一定吹干，基本问题不大。

（6）实际样本加标准品，测定添加回收率：（这个是客户最常出现问题的）

①实际样品要注意看背景是多少，假设背景是1，如果我们添加是2，那么这样产生的误差就非常大了，这种情况添加要做到10倍以上，才能减少这种误差。

②吹干步骤多注意一定吹干。例如：1ml甲醇洗脱时，收集全部洗脱液，看看是多少量，如果洗脱液大于1ml了，证明前面步骤没吹干，需要再多吹干下

③如果空白测添加回收率正常，但是实际样本测添加回收率低，那么基本可以确定是样本提取的问题。