细胞培养后,需要对其生长情况、形态甚至生物学性状进行观察。由于细胞小而复杂,若不借助适当的手段,难以观察其形态、结构,更难发现细胞内各种组分的分子组成及功能。目前,已有多种研究细胞的技术,从光学显微镜到电子显微镜,从一般细胞化学法到免疫化学法。细胞染色是研究细胞生物学特征的一种常用手段,然而,对于细胞实验新手来说,想要获得一张漂亮的细胞染色图并不容易。染色试剂不会选、细胞染色不均匀、染色时切片脱落等都是很常见的问题。今天小爱就为大家整理了几种常用细胞染色方法及染色剂选择指南,快来学习! 表 1 几种常用细胞染色方法及特点
了解细胞染色方法后,下面小爱向大家介绍研究不同细胞结构用到的荧光染料。
DiD、DiR、DiO 和 DiI 染料是最常见的细胞膜染料(见表2),它们是一族亲脂性的荧光染料,用于细胞的形态学和结构研究。该系列染料进入细胞膜后,会在整个细胞膜上侧向扩散,在最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。其中 DiD 染料的染色效率高,染色均一,荧光不易猝灭,无明显细胞毒性,且受自身荧光背景干扰小。目前 DiD 已成功应用于多种细胞的体内示踪研究,如 Treg 细胞、间充质干细胞、肿瘤细胞、造血干祖细胞等。 表 2 细胞膜常用染料及荧光颜色
生物染料在细胞结构和组分鉴定中有着广泛的应用,除细胞膜研究外,我们经常也会对一些其它细胞结构及成分进行探索,例如线粒体、溶酶体、蛋白质、细胞核等,而对于不同的细胞结构有不同的染料进行染色,小爱总结如下:
DAPI 染色液(DAPI Staining Solution)常用于细胞核染色,可将细胞核染成蓝色。鬼笔环肽(Phalloidin)是细胞骨架的染色神器,罗丹明标记的 Phalloidin(TRITC- Phalloidin)可将细胞染成橙红色,DAPI 与 Phalloidin 染色液是研究细胞形态变化时经常用到的两种共染的试剂,染色效果可见图1[1]:A1-E1 用 TRITC-鬼笔环肽(橙红)染色的细胞骨架免疫荧光图;A2-E2 用 DAPI(蓝色)染色的细胞核免疫荧光图;A3-E3 合并的 L929 细胞免疫荧光染色图。图 2[2]是 S100A16 过表达或下调前后 PDAC 细胞形态的变化。
参考文献: [1] Li J, Chen JN, Peng ZX, et al. Multifunctional Electrospinning Polyhydroxyalkanoate Fibrous Scaffolds with Antibacterial and Angiogenesis Effects for Accelerating Wound Healing[J]. Applied Materials & Interfaces. 2022. [2] Li T, Ren TY, Huang CM, et al. YS100A16 induces epithelial-mesenchymal transition in human PDAC cells and is a new therapeutic target for pancreatic cancer treatment that synergizes with gemcitabine[J]. Biochemical Pharmacology 189 (2021) 114396.
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