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RT-PCR 简介 RT-PCR 是指将 RNA 的反转录(RT)和 cDNA 的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。利用逆转录酶将 RNA 逆转录(RT)成 cDNA(Complementary DNA),再以 cDNA 为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR 的常见应用包括基因检测、转录物变异检测,以及克隆和测序用 cDNA 模板制备。 图 1 RT-PCR 分类 一步法和两步法是两种最常用的 RT-PCR 方法。 图 2 一步法原理 图 3 两步法原理 一步法 VS 两步法 一步法 RT-PCR 相比较两步法 RT-PCR,可大大简化工作流程、降低结果差异、同时将污染可能性降至最低。一步法适用大量样本的处理,可应用于高通量。 与一步法 RT-PCR 相比,两步法 RT-PCR 的缺点包括多个步骤延长了工作流程、增加样本处理和操作步骤以及提高污染和结果变异的可能性。但是两步法可以获取大量的 cDNA,同时可检测单个 RNA 样本中多个基因。 以下是博日一步法试剂盒介绍 博日 BioRT Master 逆转录扩增(RT-PCR)试剂盒(一步法)是博日科技(BIOER)专为以 RNA 模板在同一个反应体系中完成反转录和 PCR 而设计的,操作简单便捷。同时反应过程中不需要额外开管,也无需添加试剂,大大的提高了检测的通量,同时将污染的可能性降至最低。 产品特点 1、一管式反应将污染规避到最小 图 4 2、采用专利配方的 AMV 酶,具有超高的热稳定,在高达 60℃ 的反应温度可有效打开 RNA 二级结构,能应对普通逆转录酶无法应对的复杂模板。 图 5 操作流程 实验案例 1、1 μg 鼠肝总 RNA 分别用 BioRT 逆转录扩增(RT-PCR)试剂盒(一步法),I 公司一步法 RT-PCR 试剂盒和 P 公司一步法 RT-PCR 试剂盒在 50℃ 和 55℃ 进行 RT-PCR 后电泳结果。 图 6 2、1 μg 鼠肝总 RNA 分别用 BioRT 逆转录扩增(RT-PCR)试剂盒(一步法)进行 RT-PCR 后电泳结果。 图 7 以下是博日两步法试剂盒介绍 博日 BioRT 逆转录扩增(RT-PCR)试剂盒(两步法)采用美国先进技术生产的高质量逆转录酶(AMV 酶)和长片段高保真的 Taq mix DNA 聚合酶。AMV 逆转录酶具有较高的热稳定性,其反应温度可达 60℃,可以逆转录具有复杂二级结构的 RNA 模板(见图 5),可逆转录得到长达 12kb 的 cDNA。长片段高保真的 Taq mixDNA 聚合酶具有高保真、高灵敏度、高延伸速度等特点,可合成长达 6kb 的 PCR 产物。 产品特点 1、高保真、高产量、高灵敏度 2、多基因检测 3、可轻松应对复杂的二级结构 RNA 模板 4、使用方法简便灵活,可获得大量 cDNA,以便其他实验使用 实验案例 1 μg 人类白介细胞总 RNA 用 BioRT 逆转录扩增(RT-PCR)试剂盒(两步法)进行 RT-PCR 后电泳结果。 图 8 在结合实验的基础上,根据不同试剂盒的特点选择试剂,往往事半功倍! 部分关联产品: 杭州博日科技股份有限公司是一家专业从事生命科学仪器和试剂、耗材研发、生产、销售及服务的企业。 仪器以及试剂种类众多,详情请咨询:0571-87774319 |