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请阅读我们的 FAQ,以了解有关 产品的更多信息 使用试剂盒完成测定的优点 A. 省事儿。 您不再需要查阅文献来选择测定方法,订购试剂和配制试剂,反复调整以优化测定体系和测定步骤,从而节约了大量时间和精力。更加重要的是,上述这些工作都是需要丰富的测定经验的! B. 有保障。 试剂盒都是自己研发和生产的,严格按照专一性、重复性和简易性的要求进行研发,经过不同用户不同样品实践测定的检验,并且根据用户反馈不断进行优化调整,质量是完全由保障的。 提供售前、售中和售后的专业咨询,针对用户的具体情况,包括样品、研究目的、测定条件和测定中碰到的问题,提供测定指标、试剂盒种类、试剂盒规格、试剂盒数量、具体操作、预测定和测定结果分析等全方位指导。 实行先用后付政策,即用户先拿到试剂盒,经过实际使用对于质量和服务满意后再付款。这样的政策,不仅是因为我们对于自己的产品和服务有信心,而且是对于用户的诚信有信心(毕竟都是高学历的研究人员)。同时为了方便用户能够快速拿到试剂盒,完成测定,也是为了适应现在的报销政策,方便用户报销! C. 不同研究者的测定数据可以直接相互比较,利于同行交流。 此前很多参考文献中的测定数据不能直接比较,因为测定方法存在差异。 随着大家都用试剂盒进行测定,由于测定方法已经标准化,不同研究者的测定数据就可以直接相互比较,利于同行交流,共同推进所在研究领域的深化。 D. 论文中材料与方法部分更加容易撰写。 只要简单写明哪些指标用哪个公司生产的哪些试剂盒进行测定,其依据原理分别是什么即可(参见试剂盒说明书)。 为什么要购买烜雅试剂盒 测定是个技术活儿,而且对于经验要求很高! 打个比方,测定就好比做菜。不是有了菜谱,新手就会做菜,成为大厨的;更加不用说,做出一桌色香味俱全的宴席啦! 用户自己完成测定的全过程,就相当于到农贸市场买菜回家自己做菜,需要先查阅菜谱,构思做哪些菜品,然后到农贸市场购买所需的各种原材料,最后对照菜谱做成菜;购买试剂盒完成测定,就相当于从饭店购买半成品,回家简单热一热,就可以轻松做出一桌色香味俱全的宴席。后者不仅省事儿,而且可以保证菜品的质量。 建议购买试剂盒来进行测定,或者干脆代测,把样品送给专业公司进行测定,即来样检测。这样可以克服用户缺乏测定经验,显著提高科研效率! 如何保证样品的质量 决定样品质量的因素包括材料的选择、材料的培养、材料的处理和取样以及样品保存。 样品不合格,后续测定做得再好也是零,甚至是负数,因为浪费了大量时间、样品和经费! 样品是最宝贵的,因为试剂等可以再买,一旦样品质量不行,或者用完了,就只有重新培养、处理和取样,这个过程会比较长! (1)材料的选择:选择合适的研究问题的材料。 细分为:遗传背景明确,不能混杂;如果是转基因材料,先要确认是否在拟研究的器官或者组织中表达;材料是否容易大批量培养,拟取样部位是否容易区分和获得,从而决定了能否得到足够的样品,供后期测定用。 (2)材料培养:查阅文献,结合材料特性,根据所研究的问题,确定合适的培养条件。原则保证材料正常生长发育,而且尽可能控制环境条件稳定一致。 例如温度、水分、CO2浓度、培养基等,不要过于信任控温仪器,要实际测定并且经常观察是否为要求的温度以及温度变化是否平稳。 (3)材料处理:确定设计处理方式、处理部位、处理时期和处理浓度等处理组合。 通过预实验,一方面要找出最佳处理(即该处理与对照相比,出现了预期中最典型的生物学现象),这样可以大大减少处理的种类;另一方面还可以确定从最佳处理开始到典型生物学现象出现的时长,为设计取样间隔提供参考。这样,在正式实验时,仅仅设计对照和最佳处理两组即可,从而大大减少材料培养与处理、取样和测定的工作量。可见,预实验非常重要! (4)取样:典型性、代表性、间隔和数量。 取样典型性是指,与对照组相比,处理组一定要呈现预期的生物学现象或者症状,取样时要有意识地选取具备典型生物学现象或者症状的样品,通俗地讲就是处理组的样品与对照组样品相比一定要存在显著差异,而且最好差异程度近似的那些个体或者器官或者组织。否则,进一步进行后续测定是没有意义的。 取样的代表性是指,实际测定所取的样品部分一定要能够代表整个样品状况。否则测定结果无法代表整个样品。随意取样品的一部分进行测定,常常还会导致测定结果变化不规律。例如,土壤样品可以混匀后按照对角线法依次减少样品量,即按照二分之一、四分之一、八分之一等,直到剩下的样品量符合测定所需量;叶片或者果实样品,可以通过对称轴法,依次去掉二分之一、四分之一、八分之一等,直到剩下剩下的样品量符合测定所需量。再如叶片或者果实等样品,可以根据对称轴来取样。如果样品数量不少很多,还可以先全部液氮研磨后,再进行分装,这样就能充分保证取样的代表性。 取样间隔:取样期是指从处理开始,到处理组出现预期中的典型生物学现象出现为止;除非有明显发育阶段的变化,或者有参考文献,否则可以考虑等间隔取样,即把整个取样期等时间间隔进行取样。一般应该至少划分为五个时期以上进行取样。在可能的情况下应该尽可能取样时期间隔小一些,以确保取到指标变化拐点的样品。 取样数量:指每种处理(包括对照组)每次取样品的数量。一般而言,只要条件许可,就应该尽可能多取,这样可以保持后期测定的需要(宁可用不上,也不能不够测定用)。因为测定过程中可能因为各种各样的原因导致测定失败,或者对测定结果有疑问,这样可以重新测定,或者不测定一些疑问的样品。另外,还可以待测定结果出来后,马上进行分析,进一步进行新的指标测定。因为生物样品不同批次之间可能存在差异,同一批样品进行测定,就可以有效减少样品差异。 (5)样品规范保存:样品保存过程中要尽最大可能减少样品中拟测定指标发生变化。 有条件的情况下,样品取好后立即进行液氮速冻。如果不具备条件,也应该尽可能缩短样品进入超低温冰箱的时间。对于大体积样品,应该进行分割,分别小包装后再液氮速冻或者放入超低温冰箱。如果需要测定多个指标,应该把样品分成小包装再冻存,免得反复从冰箱取出和放回,避免反复冻融对样品的破坏。样品放进冰箱之前,要检查冰箱是否正常工作、冰箱设定温度是否正常和冰箱内样品是否过多,样品过多、样品体积过大或者样品排放不整齐(没有留出通风通道),会严重影响冰箱制冷效果,不能确保样品迅速达到所需冷冻温度,造成样品变质!另外,样品放进冰箱后不是就万事大吉了,停电或者别人拿去样品时,都可能造成样品变质,等你从冰箱拿出样品时,你会发现样品仍然冻得硬邦邦的,但是其实样品已经变质了。 如何防止试剂盒失效? 1)订购日期。在打算进行测定的日期,提前一周左右订购。通常下单后24小时内即可发货,一般最多5个工作日即可送达。通常开封后一月内用完试剂盒,不要过早订购,以免试剂盒失效。 (2)留下手机号码,以便快递及时通知取货。尤其是节假日,一定要保证通讯畅通,防止没人收货。 (3)收到试剂盒后,检查外包装是否正常。马上打开,按照试剂盒说明书核对试剂数量是否正确,注意瓶中试剂状态是否与说明书一致。如果有问题,或者怀疑,马上联系公司销售,进行确认。如果没有问题,请务必按照说明书进行试剂的保存。注意,不同试剂,可能需要分别保存在常温(25℃)、4oC和-20oC,务必分别按照要求保存,不要整个试剂盒塞到冰箱中。 如何进行预测定? (1)务必在7个工作日内进行预测定,以确定该试剂盒是否适合您的样品,以免造成试剂盒和样品的浪费。 (2)选择2~3个预期差异比较大的样品,严格按照说明书进行操作,注意仪器工作状态,操作规范,控制好测定条件,尤其是温度。 (3)如实与公司销售沟通预测定结果,公司研发人员会确认测定结果是否正常,是否需要调整,如何进行调整,从而确保您的测定结果可靠。 样本研磨时匀浆可以用液氮吗? 一般情况下将研钵置于冰盒上匀浆即可(冰浴匀浆),用液氮匀浆也可以,但是液氮匀浆会反复冻融,研磨起来比较费劲,同时要做好保护措施,防止冻伤手指。 测定前是如何调零? 使用分光光度计的用户,用蒸馏水或去离子水直接调零。使用酶标仪的用户,可以在一个孔里加入200μL的蒸馏水或去离子水,作为调零孔。 样本如何稀释或浓缩? 样本测定值若超出检测范围,可以将提取的上清液用提取液稀释后重新测定。一般从高到低,按照2倍,5倍,10倍,20倍的顺序,选择一个合适的稀释倍数。样本测定值若低于检测范围,可以提高样本浓度,如称取0.2g样本加入1mL提取液匀浆,相当于将样本浓缩2倍。 如何保证测定温度? (1)根据说明书中指定测定温度,提前打开保温设备(如水浴锅),设到指定温度,在达到指定温度后,把冷藏的试剂转移到保温设备中保温30分钟以上,以保证反应一开始,就在指定温度中进行。 (2)对于拥有酶标仪的用户,直接提前预热,在达到设定温度后,可以直接把预热后的试剂,加入酶标板,然后开始反应。 (3)在保温设备(水浴锅和金属浴,最好是后者)进行。注意提前对保温设备进行预热,达到设定温度后再进行反应。但是仅适用于能够终止的反应。 (4)对于瞬间完成的反应,或者对温度不敏感的反应,为了提高重复性,最好在同一温度下完成检测。例如打开空调,设定在室温,如25℃。当然,所有控温设备,都要进行预热。 如何提高测定质量? (1)及时核对试剂盒中试剂数量和状态,有疑问及时与公司研发人员沟通,并且分类保存,不宜保存时间过长。 (2)测定前认真阅读说明书,就有疑问的地方,及时与公司研发人员沟通,并且确认。 (3)严格按照说明书规范操作,做好预测定;并且就预测定结果,及时与公司研发人员全面沟通(包括样品种类、样品保存状况、有无特殊处理、某些试剂需要现用现配、操作是否规范、仪器工作状态、用水与用品有无污染、测定中有无异常和测定结果是否正常等)。 (4)待公司研发人员确认检测方法和操作没有疑问后,再开始大批量测定。 试剂盒有哪些常见规格? (1)50管的试剂盒,常量法试剂盒,用分光光度计检测。1mL的比色皿检测。 (2)100管的试剂盒,微量法试剂盒,用酶标仪(酶标板)或者分光光度计(0.25 mL比色皿)检测。 试剂盒规格中是什么意思? (1)50T/48S:50T指能够做50次测定,48S指可以测试48个样品。如果每个样品重复测定3次,那么只能测定16个样品。其中有2次测定用于空白管或者对照管。值得特别注意的是,50T/24S中由于每个样品测定都需要做对照,因此能够测定样品的数量仅为8个(假设做3次重复) (2)100T/96S:100T指能够做100次测定,96S指可以测定96个样品,如果每个样品重复测定3次,那么只能测定32个样品。其中有4次测定用于空白管或者对照管。 注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理论测定次数少1~3次。其它规格的含义依次类推。值得特别注意的是,100T/48S中由于每个样品测定都需要做对照,因此能够测定样品的数量仅为16个(假设做3次重复)。 常量法和微量法试剂盒能否通用? 同一指标的常量法与微量法试剂盒不可以通用,因为两者测定体系不同。如果用户自行改变,公司不能保证测定质量。 比色皿有哪些规格? (1)常量比色皿,如1mL和3mL等,晅科常量法试剂盒都是选用1mL体系,只能用1mL比色皿,不可以用更大体积的比色皿,否则试剂量不够,无法正常比色。如果用户需要,公司可以提供1mL比色皿。 (2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,晅科微量法试剂盒都是选用0.25 mL比色皿。如果用户需要,晅科公司可以提供0.25mL比色皿。一般客户都选择使用酶标仪(需要自备酶标板)。 (3)紫外波长检测需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。晅科公司可以提供石英比色皿。 (4)不同规格的比色皿,其外观大小是一致的,都是1cm光径(也有0.5 cm光径的比色皿,不常见,也可以用,但是计算时要注意修改计算公式),其内容积差异在于壁的厚度。 UV板和普通酶标板有何区别? 微量法一般使用酶标板,当检测波长≥340nm时,用一般的酶标板即可,价格便宜,一次性使用当然也可以用UV板代替,只是有些浪费。当检测波长<340nm时,须选用区别于一般酶标板的UV酶标板。价格比普通的酶标板贵,但可用洗板机清洗,重复利用。 为什么不同样品测定值差异不显著? (1)该指标在不同样品间确实无变化。 (2)操作重复性不好,掩盖了组内和组间差异。后者可以看重复之间吸光度变化的重复性,如果重复之间吸光度变化相差很大,表明主要可能是操作不规范造成的,尤其是加液体积不准确和反应时间控制不准确。 为什么△A会接近于零? 表明反应不能发生。 (1)如果是测定酶活性,表明样品几乎没有酶活性;如果是测定某种物质,则表明该样品几乎不含有此种物质。 (2)体系中还发生了别的反应,该反应的底物或者产物在该波长下也有光吸收,并且变化方向相反,几乎抵消了希望的酶反应,可以通过设置新的对照排除。 (3)样品保存不当。这就需要用户自己仔细检查样品处理、采集和保存以及提取状况。 (4)试剂盒质量问题。可以换一种完全不同的样品来验证,比如去室外随机采取某种 正常的叶片来测定。如果同样没有活性,那表明试剂盒质量问题的可能性很大。请用户立即联系公司。 为什么△A会出现负值? (1)可逆反应造成。可以通过适当缩短反应时间来防止逆反应的发生。 (2)体系中发生了别的反应。该反应的底物或者产物在该波长下也有光吸收,并且变化方向相反,超过了希望发生的反应,同样可以通过设置新的对照排除。 (3)反应体系中存在颗粒或者气泡。随着时间延长,颗粒沉淀或者气泡破裂,会导致吸光度显著下降,出现负值。主要注意观察,即可发现是否属于这种情况。颗粒通常来源于样品粗提液,可以提供再次离心,确保得到澄清的上清液;当然也可能来自试剂,测定前观察试剂中是否有沉淀,如果有,一方面待充分溶解后再用,另一方面待颗粒沉淀下来后小心吸取上清液。气泡通常来源于反应本身,可以通过降低反应速度(如减少样品质量提取液体积比)来防止气泡产生。 为什么不显色? (1)前处理不当,例如测定酶活性,酶已经失活,包括样品保存条件不当、使用了导致酶失活的化学试剂和提取方法不当等; (2)试剂盒保存不当,导致试剂盒中某些试剂失活; (3)该样品确实不含有该成分,例如哺乳动物肝脏中葡萄糖激酶替代了己糖激酶,选择己糖激酶测定试剂盒当然无法测定到活性。 按照说明书冷藏后出现沉淀的试剂还可以用吗? 可以。但是应该在常温中充分溶解后再用,以免试剂浓度变小,造成测定不可靠。 测定管与对照管为什么会没有差异,甚至低于对照管? (1)如果空白值有点偏高,空白管存在一定的污染情况; (2)测定与对照结果几乎没有差异;首先样本具体是什么,是否样本自身的含量偏低;再者就是提取步骤,是否按照说明书操作步骤进行,提取的充分程度,如果提取不充分也会导致结果偏低情况。可以考虑将样本取样量加大。 为什么有些试剂盒不提供标准品? (1)为了节约用户经费,对于测定体系很稳定的试剂盒,研发时建立了标准曲线,在此基础上提供了计算公式。 (2)有些检测对象本身就无法购买到标准品。 待测样本必须是鲜样的吗?冷冻样本是否可以用? 新鲜样本和冷冻样本都可用于大多数指标的测定,有一些生理活性物质容易降解,建议用新鲜样本测定,如辅酶Ⅰ、辅酶Ⅱ、谷胱甘肽等。 处理与对照相比差异不显著 A. 在排除测定存在问题的情况下,首先看看变异系数怎么样,是否特别大或者特别小。一般而言,与样品有关的变异系数有这样的规律,大田或者野生生物样品,其变异系数比较大;实验室样品变异系数比较小,其中培养细胞或者微生物变异系数更小,植物或者动物的器官或者组织变异系数居中。 B. 如果技术重复性好,样品变异系数适中的话,非常可能就是处理与对照之间确实没有差异。当然,如果所有测定的相关指标在处理与对照之间都没有差异的话,那么就得考虑是否处理不合适,或者假说不合适,即该生物学现象与假设的机制无关。 C. 还有另外一种情况,就某个或者某几个指标在处理与对照之间没有差异。如前述4(3)中H2O2代谢,由于同时有多种酶参与H2O2的合成和降解,因此很可能只是其中一种酶活性发生了显著变化,其它酶活性没有发生变化,就可以导致H2O2含量发生显著变化。在这种情况下,就会出现另外几个酶活性在处理与对照之间没有显著变化。 (6)同一处理内不同样品间某个指标没有显著差异 与(5)类似,很可能就是该生物学现象的出现与这个指标无关。 数据与文献报道差异很大 这里讲的文献报道,包括公开发布的文献和自己实验室此前的测定数据。一般而言,生命科学研究的测定数据差异会很大,这与样品本身和测定方法都有关。 A. 样品本身的影响。同一指标在不同样品,同一样品不同发育阶段或者不同环境下,会发生非常大的变化,尤其是在植物中,或者野生环境下,有些甚至能够达到数量级的程度。 B. 测定方法的影响。同一指标不同测定方法的测定结果,有时也会出现非常大的差异。 C. 操作和仪器设备的影响。取样代表性、匀浆程度和测定条件等都会有很大影响。不同仪器设备的检测限和稳定性也会有一定影响。 因此,测定数据与参考文献的比较,必须严格注意样品的遗传背景、培养与处理条件和取样的典型性与代表性等等。另外,还需要注意单位和分母的选择,如摩尔数还是毫克、干重还是鲜重、每百万细胞还是每毫克蛋白质等等,当单位换算成一致时,有时您会发现其实差异没有那么大。 D. 参考文献的质量。如果是发表论文,或者自己实验室的测定数据,就存在其是否可靠的问题,因为样品质量、测定方法和操作水平都可能导致前人的测定结果不一定可靠。当然,如果是国家或者行业提供的标准测定数据,通常就很可靠,必须先复查自己此处的测定的结果是否存在问题。 E. 从发表论文的角度来讲,其实生命科学研究的目的就是要发现处理与对照之间在某些指标上是否存在显著差异。通常审稿人并不关心绝对值,因此不同研究者的测定数据有差异,并不影响审稿结果。 F. 更应该关心所测定指标的变化趋势相互之间能否配合,得出一个明确的结论!这才是对论文发表起关键作用!
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