大家都在搜
萤光素酶报告基因检测技术 什么是报告基因? 报告基因(Reporter Gene)技术是常用于检测转录因子与目的基因相互作用的重要技术之一。 理想的报告基因须具备以下几个条件: 1. 编码的表达产物必须与细胞内源性的所有基因相区别,编码产物的活性不受宿主细胞的干预。 2. 报告基因编码产物的检测快速简便、经济、灵敏高,且重现性好、结果可靠,测量数据应该有较宽的线性范围。 3. 细胞内的其他基因产物不会干扰报告基因产物的检测,同时报告基因的表达也不改变宿主细胞的生理功能。 常用的报告基因有:氯霉素乙酰转移酶(CAT),β 半乳糖苷酶(LacZ),萤光素酶(Luciferase)以及荧光蛋白家族。其中萤光素酶报告基因具有检测方便、灵敏度高、价格低等优点,使用非常广泛。 萤光素酶是自然界中能够产生生物萤光的酶的统称。萤光素酶可以催化萤光素氧化成氧化萤光素,在萤光素氧化的过程中,会发出生物萤光。然后可以通过萤光测定仪测定过程中释放的生物萤光。目前,最有代表性的是从甲虫中分离得到的萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)和从海肾中分离得到的海肾荧光素酶(Renilla luciferase)。 图 1. 萤光素酶的反应原理图 转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子,某些转录因子与其靶启动子中的特异序列结合,从而对基因的表达起抑制或增强的作用。萤光素和萤光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达,是检测转录因子与目的基因启动子区 DNA 相互作用的一种检测方法。 其原理简述如下: (1)构建一个将靶启动子的特定片段插入到萤光素酶表达序列前方的报告基因质粒。 (2)将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染细胞。如果此转录因子能够激活靶启动子,则萤光素酶基因就会表达,萤光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。 (3)加入特定的萤光素酶底物,萤光素酶与底物反应,产生萤光,通过检测萤光的强度可以测定萤光素酶的活性,从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。 图 2. 萤光素酶报告实验图解 在用萤光素酶定量基因表达时,通常会采用第二个报告基因作为内对照,使第一个报告基因的检测均一化,从而减少实验的变化因素干扰,比如:培养细胞的数目和活力的差别, 细胞毒性,细胞转染和裂解的效率等。通常以萤火虫萤光素酶为报告基因,海肾萤光素酶为内参基因。 双萤光素酶报告实验过程如下图所示。 图 3. 双萤光素酶报告基因实验流程 碧云天提供多款萤光素酶报告基因检测试剂盒,稳定性好,灵敏度高,系列中不同产品各有所长,效果可媲美国际一线大牌产品,更有 II 代产品粉末状新包装,保存更稳定。
部分产品使用效果图: 图 4. Bright-Lumi™ 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 (Bright-Lumi) 和碧云天的同类产品 One-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 (One-Lumi)、Steady-Lumi™萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 (Steady-Lumi) 及国外同类产品 (Competitor P) 对转染阳性萤火虫萤光素酶报告基因质粒的 HeLa 细胞的检测效果。 图 5:Dual-Lumi™ II 双萤光素酶报告基因检测试剂盒 (Dual-Lumi II) 和国外同类产品 (Competitor P) 对共转染萤火虫萤光素酶报告基因质粒和海肾萤光素酶报告基因质粒的 HeLa 细胞的检测效果。 不同萤光素酶报告基因检测试剂盒的特点和比较见下表,大家可以根据实验需求进行选择。 https://www.biomart.cn/66245/news/3009032.htm 除了常见的萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶之外,近年发现了一种来源于海洋桡脚类动物 Gaussia princeps 的 Gaussia 分泌型萤光素酶,为单条肽链的单体酶,分子量较小 (20kD),且具有分泌性信号肽,可通过内质网分泌到细胞外。与其他萤光素酶相比,使用 Gaussia Luciferase 作为报告基因有更多的优势: 1. 分泌型萤光素酶,可在不同时间段直接取上清检测,无须裂解细胞; 2. 发光强度高,是其它萤光素酶的 1000 倍; 3. 反应无须 ATP,不受 ATP 影响; 4. 稳定性高,对温度、pH 值等耐受性强。 碧云天可提供多种新型 Gaussia Luciferase 萤光素酶系列报告基因检测质粒,该系列质粒具有氨苄青霉素抗性,所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理,在保持原有功能不变的情况下,使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。助力您的报告基因检测实验! 详细信息可点击以下链接了解详情: https://www.beyotime.com/support/news-events20201210.htm 碧云天还可提供双萤光素酶报告基因实验技术服务,详情可通过服务热线或邮箱进行咨询。 服务热线:400-168-3301 转 6 号键 邮箱咨询:service@beyotime.com |