生物药创新技术大会(BPIT)即将于 2021 年 4 月 9 日 - 10 日在上海浦江皇冠假日酒店拉开序幕,上海逍鹏生物携手以色列 BI 与 VivaCell 品牌与您相约。 VivaCell 品牌介绍 Viva (美 [ˈviːvə] ) 是意大利文,表示生命力,同时有万岁、欢呼声的用法。VivaCell 意蕴「细胞万岁」,同时缩写为「VC」,有维生素 C (Vitamin C)的含义。VC 是人体细胞必须的营养元素,可促进机体抗体的形成,增强机体的免疫功能等。
各位老师在细胞培养过程中可能会出现各式各样的问题,
下面我们整理了最常见的问题:
细胞为啥总是一言不合就抱团生长? 是细胞污染了还是正常现象? 是消化不好了还是铺板有问题? 请认真阅读以下干货,看看能否帮您答疑解惑! 细胞生长的时候肯定是要相互联系,大部分的细胞都是要成片生长的,应该仔细观察每种细胞的状态,抱团并不一定代表不好: 1. 若细胞轮廓清晰,可看清楚一个个的细胞,像葡萄一样,一串串的,是状态好的,说明细胞在分裂。 2. 但大部分细胞抱团绝对不是一件好事!如果轮廓消失,出现细胞融解或细胞变灰暗、透光性变差,就是细胞死亡了。葡萄状和抱团,在镜下其实很容易区别。抱团死亡的细胞可以看到细胞碎片,如下图:
3. 细胞抱团是因为细胞污染了吗?一般细胞培养液清澈,就不是污染。如果是污染了的话,可以通过观察培养液颜色,若污染,则很浑浊。 1. 细胞死亡释放出 DNA,缠绕其他细胞,形成黏性的细胞团(消化的过程可能过于粗暴,吹打太用力,消化太久,消化液太强或有毒性等)。 2. 细胞离心速度过大或时间太长。 3. 消化不完全的时候,细胞和细胞之间的连接没有分开;消化过度的时候,圆形的细胞容易聚堆,再分开很困难! 4. 状态不好、老化的细胞,也可能会出现抱团生长的情况(比如换液不及时、长的太满才传代、污染等造成的细胞状态差)。 5. 传代时没有吹打均匀,细胞团多,培养时就会是一团一团的。 6. 传代后细胞铺板不均匀。 7. 有可能是杂细胞,或者死细胞。 8. 接种不均匀,或者是细胞未消化开。 9. 振荡培养或细菌(胞)量过多的话就会成团。 三、如何避免细胞成团 1. 无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞。 2. 对于贴壁非常牢固的细胞(如MDCK),为了细胞更好的状态,建议分多批多次消化,这样才能最大限度地降低胰酶对细胞的损伤,保证细胞的状态能够最优。 3. 细胞生长密度不要太高,70%-80% 就好(细胞刚刚基本成单层细胞,没有出现成层生长),这样细胞抱团的几率就大大减少了。如果细胞已经长成集落,可先将细胞低密度传代,第二天再消化传代,这样连续传三次,细胞抱团就会越来越小,这样几代过后,再按照常规消化方法和时间能将细胞逐渐传成单个的。 4. 消化过程中最好不要使劲摇动培养瓶,这样细胞特别容易成屑样脱落。细胞一旦脱落入悬液里就很难再将他吹打成单个(因为细胞没有受力点了,所以细胞很难分散开)。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开,严格控制好消化程度。
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