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货号:YX-C-A404 规格:50管/24样 多酚氧化酶检测试剂盒(PPO)说明书 可见分光光度法 产品简介: PPO主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是一种含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化产生醌,从而引起褐化,与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。 PPO能够催化邻*苯二酚产生醌,后者在525nm有特征光吸收。 试验中所需的仪器和试剂: 可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 产品内容: 提取液:液体,60ml×1瓶,4℃保存; 试剂一:液体,40ml×1瓶,4℃保存; 试剂二:液体,10ml×1瓶,4℃保存; 试剂三:液体,20ml×1瓶,4℃保存 操作步骤:
2、称取约0.2g组织,加入1ml提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。 二、测定操作表:
注意:每个测定管需要设置一个对照管,可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行1min沸水浴处理 PPO活性计算: 1、血清、血浆或果汁PPO活性计算 单位定义:每分钟每毫升样品在每毫升反应体系中使525nm吸光值变化0.01为一个酶活力单位 PPO(U/mL)=(A测定-A对照)×反应总体积÷(V液*×V样*÷V样总*) ÷0.01÷反应时间 =80×(A测定-A对照)÷V液* 2、组织中PPO活力的计算: (1)按样本蛋白浓度计算: 单位的定义:每分钟每mg组织蛋白在每毫升反应体系中使525nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。 PPO(U/mg prot)=反应总体积(1200μl)÷样本体积(150μl)÷反应时间(10min)÷0.01×(A测定-A对照)÷蛋白浓度(mg/ml)=80×(A测定-A对照)÷蛋白浓度(mg/ml) (2)按样本鲜重计算: 单位的定义:每分钟每g组织蛋白在每毫升反应体系中使525nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。 PPO(U/g 鲜重)=反应总体积(1200μl)÷样本体积(150μl)÷反应时间(10min)÷0.01×(A测定-A对照)÷样本鲜重(g/ml)=80×(A测定-A对照)÷样本鲜重(g/ml) 3、按细菌或细胞密度计算: 单位的定义:每分钟每1万个细菌或细胞在每毫升反应体系中使525nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。 PPO(U/104 cell)=反应总体积(1200μl)÷样本体积(150μl)÷反应时间(10min)÷0.01×(A测定-A对照)÷细菌或细胞密度(104/ml)=80×(A测定-A对照)÷500* *V液:加入的血清、血浆或果汁的体积 *V样:加入样本体积 *V样总:加入提取液体积 *500:细菌或细胞总数500万 实验代做服务: |