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免疫组化ABC法
2019-01-11 23:26   来源: 上海研谨生物科技有限公司  点击次数: 关键词: 免疫组化实验代做,免疫组化法公司
一)、仪器设备
   1)18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉;
    2)水浴锅

(二)、试剂 
    1)PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L。
    2)0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液(CB,pH6.0,1000ml):柠檬酸三钠 3g,柠檬酸 0.4g。
    3)0.5mol/L EDTA缓冲液(pH8.0):700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O,用10 mmol/L NaOH调至pH8.0,加水至1000ml。
    4)1mol/L的TBS缓冲液(pH8.0):在800ml水中溶解121gTris碱,用1N的HCl调至pH8.0,加水至1000ml。
    5)酶消化液: a、0.1%胰蛋白酶液:用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制。 b、0.4%胃蛋白酶液:用0.1N的HCl配制。
    6)3%甲醇-H2O2溶液:用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。
    7)封裱剂:
    a、甘油和0.5mmol/L碳酸盐缓冲液(pH9.0~9.5)等量混合;
    b、油和TBS(或PBS)配制。 
    8)TBS/PBS pH9.0~9.5,适用于荧光显微镜标本;pH7.0~7.4适合于光学显微镜标本。

)、   
    SABC法
    1)脱蜡、水化。
    2)PBS洗两次各5分钟。
    3)用蒸馏水或PBS配置新鲜的3%H2O2,室温封闭5~10分钟,蒸馏水洗3次。
    4)抗原修复。
    5)PBS洗5分钟。
    6)滴加正常山羊血清封闭液,室温20分钟。甩去多余液体。
    7)滴加抗小鼠抗(合适的浓度,室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时 

  4℃过夜后在37℃复温45分钟)。
    8)PBS洗三次每次2分钟。
    9)滴加生物素化二抗,20℃~37℃20分钟。
    10)PBC洗3次每次2分钟。
    11)滴加试剂SABC,20℃~37℃20分钟。
    12)PBS洗4次每次5分钟。
    13)DAB显色:DAB显色试剂盒或者自配显色剂显色(镜下掌握显色程度)。
    14)蒸馏水洗。苏木素复染2分钟、盐酸酒精分化。
    15)脱水、透明、封片、镜检。



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