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慢性粒细胞白血病(Chronic Myelocytic Leukemia,下文简称 CML),是一种影响血液及骨髓的恶性肿瘤,抑制骨髓正常造血,通过血液扩散全身,导致病人出现贫血、容易出血、感染以及器官浸润等病症。 监测 CML 疾病负荷的常规方法有三种:
那么为什么要检测 BCR-ABL 水平呢? 研究人员发现 CML 患者体内22号染色体更短,后续研究指出是因为这类患者体内9号染色体上的ABL基因会与22号染色体上的BCR发生里交换,形成BCR-ABL融合基因,该基因可转录出一个8.5kb的异常mRNA,最终翻译成210kD大小的蛋白质——P210,P210具有较强的酪氨酸蛋白激酶活性,可通过多种信号转导途径来活化原癌基因和某些细胞因子,导致细胞的恶性转化。Ps: >95% CML 病例为 P210「 b3a2/b2a2」(或称「e14a2/e13a2」,下图红框标记)型。 国际上如何利用 BCR-ABL 水平指导临床? %IS:International Scale percent ratio CF:转换因子(将一个特定的实验室中得到的 BCR-ABL 值与从一个中心参考实验室特定样本得到的一组 BCR-ABL 值进行比较,CF 值需要定期进行重新评估) MR:Molecular log Reduction level 即通过检测 BCR-ABL 及 ABL 水平结合每个实验室的 CF 值来计算 %IS 值,然后通过%IS 值反应 MR 水平,最后借此指导临床治疗,调整治疗方案。下表中 MMR 意为主要分子学反应,是目前 CML 患者的重要治疗目标。 如何检测 BCR-ABL 水平? 提示:目前临床上检查 BCR-ABL 融合基因的金标准是 qPCR 技术,但由于 qPCR 技术的定量检测依赖标准的参考物质。此外 qPCR 技术的技术局限导致检测灵敏度不够高,对微小残留病无法实现有效监测。 那么有没有一种技术/一款试剂盒能够高灵敏度地对 BCR-ABL 融合基因进行准确定量呢?答案是有的,但目前在中国还没有进入临床应用阶段,且跟着小编往下看...... 众所周知,Bio-Rad QX200 微滴式数字 PCR 技术(下文简称「ddPCR」)以分子计数的方式实现对靶标核酸分子的绝对定量。相对荧光定量 PCR 技术来说,ddPCR 技术不依赖于标准曲线,且灵敏度、重复性和准确性有很大提高。在癌症分子标志物发现、病毒载量分析、传染病研究、基因组结构变异及 NGS 文库定量方面都得到了广泛应用。 QXDx BCR-ABL %IS 试剂盒是 Bio-Rad 推出的基于 QX100/200 微滴式数字 PCR 平台的 BCR-ABL 融合基因定量检测试剂盒,灵敏度可达 MR4.7 或 MR5.0 水平。更值得一提的是该款试剂盒在 2017 年 12 月份获得了 CE-IVD认证,这也是第一个在欧洲获批的、针对血液样本的 BCR-ABL 定量检测试剂盒,目前也在申报美国 FDA 认证。 那么如何利用该试剂盒进行 BCR-ABL %IS 水平检测呢? 该试剂盒中除了反转录需要的试剂、引物、ddPCR 过程中需要引物探针外,还内置一系列 Control 及 Calibration 样本,确保检测结果的有效性、准确性。 Controls:高水平阳性对照 - MR0.3-MR1.0 (10%-50%IS) 低水平阳性对照 - MR3.0-MR5.0 (0.001-0.1%IS) 阴性对照 - < MR5.3 (0.0007%IS) Calibrations: ~0.1%IS 和 ~10%IS 该试剂盒与 qPCR 结果一致性,灵敏度、特异性检测结果如下: Bio-Rad 在生命科学发展的道路上不断开创,稳步前进,致力于提供更加先进的技术、更多创新的产品。 本产品在中国大陆仅限科研使用,不作为临床诊断。 Bio-Rad 是 Bio-Rad laboratories, Inc.在特定区域的商标。 参考文献: [1] Jennings L.J, George D, Czech J, Yu M, Joseph L. Detection and Quantification of BCR-ABL1 Fusion Transcripts by Droplet Digital PCR. The Journal of Molecular Diagnostics. 2014 Mar;16(2):174-9. [2] Cross N.C, White H.E etc. Development and evaluation of a secondary reference panel for BCR-ABL1 quantification on the International Scale. Leukemia. 2016 Sep;30(9):1844-52. [3] Zagaria A, Anelli L, Coccaro N etc. BCR-ABL1 e6a2 transcript in chronic myeloid leukemia: biological features and molecular monitoring by droplet digital PCR. Virchows Arch. 2015 Sep;467(3):357-63 [4] Tang Y, Wei X, Chen J, Du Y, Chu H etc. Absolute quantification of BCR-ABL1 fusion transcripts in pediatric chronic myeloid leukemia. Leuk Lymphoma. 2016 Sep;57(9):2216-8. |