树突状细胞(dendriticcells,DCs)在免疫应答的首要环节———抗原提呈中扮演着重要的角色,是目前公认的体内功能最强大的专职性抗原提呈细胞(antigen-presentingcell)。它能激活静息型 T 细胞,主要参与细胞免疫和 T 细胞依赖的体液免疫反应,在抗肿瘤免疫应答中起重要的作用。随着 DCs 的免疫治疗进入临床研究,足量、稳定产生有效的 DCs 是技术的关键。
一、人外周血 PBMC 获取:
(2)实验材料
(4)实验结果:密度梯度离心之后从上到下依次是:血浆-PBMC-Ficoll-粒细胞-红细胞。
二、磁珠分选获得 CD14 单核细胞:
(2)实验材料
(3)操作步骤
(4)实验结果:分选出的 CD14+ 单核细胞的纯度为 96.8±3.8%,得率为 81.3±8.8%%,活性为 97.5±1.4%。
三、Mo-DCs 体外诱导分化:
四、Mo-DCs 形态鉴定:
五、Mo-DCs 功能鉴定:
用 FITC-labeled dextran 评估单核细胞、imMo-DCs 或 mMo-DCs 的胞吞能力。用流式细胞仪检测平均荧光强度(MFI)。结果表明,imMo-DCs 具有最高的抗原提呈能力。
(2)迁移能力检测: mMo-DCs 具有向 CCL19 迁移的能力,并呈现剂量依赖性。
我们通过混合淋巴细胞反应实验(MLR),来评估 Mo-DCs 诱导 naive T 细胞的能力:先用 Naive CD4 + T Cell Isolation Kit II 从 PBMCs 分选出 Naive CD4 + T 细胞,再分别与Monocytes, imMo-DCs, mMo-DCs 共培养 7 天,然后检测 CD4 + T 细胞的增殖情况,结果显示:mMo-DCs 能够诱导T细胞增殖。
(4)检测 Mo-DCs 分泌 IL-12 的能力: 用 CD40L 刺激后,对 mMo-DCs 分泌的 IL-12 和 IL-10 进行定量分析。结果表明,在 CD40L 的刺激下,mMo-DCs 分泌 IL-12。 、
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