蛋白质免疫印迹(Western Blot,简称 WB)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。 WB 采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,探针是抗体,显色是用标记的二抗。 WB 可以:
1.从蛋白质混合物中检出目标蛋白质; 2.定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况; 3.用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA 相互作用后续分析; 4.若要对表达蛋白进行细胞定位,confocal(激光共聚焦)应是首选的方法; 5.若要进行蛋白相互作用的关系,应考虑免疫共沉淀技术(IP 或 co-IP)。 一.实验原理
二.实验流程
三.实验操作
1.蛋白样品制备
2.蛋白含量测定
3.SDS-PAGE 电泳
4.转膜
5.封闭及杂交
6.发光鉴定
7.增强敏感性
四.实验常见问题
五.实验视频
1.WB 问题诊断及对策 2.WB 样品制备
3.SDS-PAGE 的准备流程 4.教你怎么读电泳结果 5.WB 实验方法技巧 6.WB 注意事项 六.图表制作 手把手教你用 PS & AI 做出漂亮的 WB 结果图
|