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​ 细胞钙波的体内技术文献:光学显微镜方法
2019-06-24 14:54   点击次数: 关键词:

背景:

我们正在引入一种新的体内技术来记录细胞钙沉积,这反映了钙波传播效应的快照。然而,这种技术并不足以取代共焦激光技术的准确度和分辨率。光学显微镜设备,钙螯合剂和组织学钙染色试剂盒是必不可少的。

目的:

本研究的目的是介绍使用标准光学显微镜来显示体内离子细胞钙沉积物。

材料和方法:

草酸(OA)(100毫摩尔)是本研究中使用的钙螯合剂。将该物质在体内注入狗右心房组织,面积为1cm 2。固定样品并通过钙特异性von Kossa方案染色。

结果和结论:

组织学载玻片将细胞内钙划分为黑点。钙沉积物的异质性模仿了钙火花和钙波理论的图像。这种光学显微镜技术可以扩展细胞钙生理功能的实验研究数量。

介绍:

在这项研究中,我们正在描述一种体内技术,旨在记录由钙波传播引起的组织钙沉积。光学显微镜设备,钙螯合剂和组织学钙染色试剂盒是必不可少的。共聚焦激光显微镜已被公认为准确可视化钙波传播现象的首选“黄金标准”技术。该研究的目的不是取代已建立的共聚焦技术,而是建立我们的技术作为补充方法。

草酸(OA)是已知的钙螯合剂,描述为二元酸。它有两个负电荷区域,被带正电的钙离子Ca ++吸引。当诸如OA的钙螯合剂在体内选择性地引入组织中时,从离子胞质Ca ++转化成盐(例如碳酸钙(CaCO 3))开始发生一系列有趣的事件。von Kossa染色用于显示细胞溶质钙储存。

已发表的关于草酸钙螯合的文献可以追溯到19世纪末,当时人们首次观察到草酸盐如何导致神经肌肉器官的传导减少。从1950年代到最近,静脉注射(IV)全身钙螯合物被提倡用于治疗血管疾病。由于超出本通信范围的原因,2008年在美国停止了临床试验。争议仍在继续,一些研究人员主张对除异生生物金属毒性以外的疾病进行额外的临床试验,静脉注射乙二胺四乙酸(EDTA)作为首选药物。口服全身螯合疗法仍主要用于治疗儿童重金属中毒。早在1961年,有针对性地注射螯合剂在体外实验,其中钙螯合剂(EDTA)用于在插入的椎间盘区域解离心脏细胞。此外,在2012年,草酸盐被注入体内在狗的心脏的心脏交感神经系统中以毫摩尔量计。目的是评估神经钙螯合是否会对心律紊乱产生影响,即心房纤颤。在电生理学发现后,对实验的染色载玻片的回顾开始显示螯合剂已渗入邻近和下方的心房肌。开始出现渗入的肌细胞中钙螯合异质性的模式。该手稿强调了这些发现在细胞间细胞信号传导中的潜在应用,例如钙的传播。

材料和方法:

后在体内草酸盐注射,苏木精和曙红染色和von Kossa染色是根据由希恩DC和Hrapchak BB中所述的程序上的活组织检查样品进行,并且通过美国万事达技术冯科萨染试剂盒的步骤,参考。在非缓冲的福尔马林固定的石蜡包埋的组织切片上进行von Kossa染色,切成4μ厚度。使用二甲苯将载玻片脱石蜡,在蒸馏水中漂洗,然后在100瓦白炽灯下置于5%硝酸银溶液中40分钟。然后将这些载玻片在蒸馏水中漂洗,并置于5%硫代硫酸钠溶液中2-3分钟。然后将它们用自来水冲洗,并置于核快速红色中5分钟。最后,将载玻片在新鲜的无水乙醇中脱水,然后在二甲苯中澄清并盖上盖子。另外,在上述von Kossa染色程序之前,将对照载玻片置于1%氯化氢(HCL)溶液中5分钟,以确认钙的存在。钙溶解在酸中,而尿酸盐或磷酸盐则不溶于酸。确认了钙的存在。使用的设备是Leica DM2000明场透射光学显微镜,带有4个FLUOTAR透镜(5X,10X,20X和40X)和2个N-Plan透镜(2X和60X高干)。使用安装在TL 160 BS适配器上的摄影相机Moticam 1000和16mm镜头,使用相应的Motic Images Plus软件程序拍摄数字图像。本手稿中提供的幻灯片图像是原件,没有任何物理或数字改动。

草酸:分子量= 126- pH 1.6

浓度为100 mmol / L时,在10 ml溶剂中稀释126 mg。

本文关键词:丁香通 实验 显微镜 EDTA


编辑: dxy_uzsbvxje

 

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