实验方法

丽春红(Ponceau S)染色液的配制及使用

2010-02-01 23:19

Molecular Formula: C 22 H 12 N 4 Na 4 O 13 S 4

Molecular Weight::760.6

CAS Number: 6226-79-5

λ : 520 nm (water)

丽春红(Ponceau S)也称猩红,可以用于PVDF膜、硝酸纤维素膜(nitrocellulose membrane)和醋酸纤维素膜(cellulose acetate membrane)上的蛋白的检测。丽春红带负电荷,可以与带正电荷的氨基酸残基结合,同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合,从而形成红色的条带。丽春红染色的灵敏度不及考马斯亮蓝染色。

丽春红对蛋白的染色是可逆的,染色后可以用蒸馏水,PBS或其它适当溶液洗去。因此,蛋白质N端测序时将SDS-PAGE胶上的蛋白转移到PVDF膜,用丽春红染色后将目的条带切下用于测序。

注意:丽春红染色液不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。

使用说明

将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸没在丽春红染色液中,摇动5-10分钟或更长时间;取出印迹膜,用蒸馏水,PBS或其它适当溶液漂洗2-3次,可出现清晰条带,记录结果;用蒸馏水,PBS或其它适当溶液漂洗2-3次,每次3-5分钟,去除丽春红,进行后续的WB检测。

补充:丽春红染色液也可以直接用来染PAGE胶,不过,在染色之前最好用甲醇-乙酸溶液浸泡一下PAGE胶,起到固定蛋白的作用。

丽春红染色液的配制

常用的丽春红染色液有两种:一种用乙酸配制,另外一种用三氯乙酸(TVA)和5-磺基水杨酸(5-Sulfosalicylic acid)配制。配制方法如下:

一、用乙酸配制成分:0.1%(w/v)丽春红,5%(v/v)乙酸,ddH 2 O。

4 ℃保存,不要冻上。也可以配成“0.2%(w/v)丽春红,3%(v/v)乙酸,ddH 2 O”。

二、用三氯乙酸和5-磺基水杨酸成分:2% (w/v)丽春红,30%的三氯乙酸,30%的5-磺基水杨酸。

超方便的实验干货查询工具

微信扫码进入「丁香实验」小程序

查看全部

来源:互联网

超方便的实验干货查询工具

微信扫码进入「丁香实验」

知道了