流式实验对照组设置指南！

引言

大家都知道在所有实验中，都必须设置对照组，在类似WB、ELISA等实验设置对照组相对简单，主要目的是比较处理和未处理组的差异、证明处理有效等作用。但在流式细胞术实验中，设置对照组的目的除了证明处理有效，更重要的是需要通过设置合理对照，定义什么是信号、什么是噪音，流式实验中设置正确的对照组是获得可靠数据、区分特异性信号与背景噪音的关键。接下来我们来了解下流式实验中常见的对照类型及作用。

Section 01 — 空白对照

空白对照最基础、最常见的对照，是指未经任何荧光染色的细胞样本。空白对照的作用是：

1.  调节仪器电压：用于确定细胞的基础信号水平（即自发荧光），帮助将仪器各通道的电压设置在合理范围，避免信号"压线"；

2.  界定阴性细胞群：在FSC/SSC散点图上圈定目标细胞群，并作为后续判断阳性的基础参照。

 

Section 02 — 补偿（单染）对照

 

在多色流式实验中，由于不同荧光染料的发射光谱会重叠，必须进行荧光补偿校准，这就需要单染对照。单染对照即分别只染一种抗体的样本，有多少色的流式抗体就要做多少个单染对照。单染对照作用是：

.用于计算每个荧光染料渗漏到其他通道的比例；

.通过软件去除光谱重叠，校准荧光光谱重叠；

.确保每个通道检测到的都是"专属"信号。

 提示：当目标抗原表达较弱时，可使用补偿微球替代细胞来制备单染对照。

Section 03 — FMO 对照

FMO对照即少一个荧光通道的完全染色管（fluorescence minus one），需要这种对照是因为在多色流式实验中（尤其是大于4色的），即使其他荧光经过补偿，其扩散误差仍会提高阴性群的背景，FMO对照能完美反映这种"本底"，是设置阳性门最准确的方法，对弱阳性或连续表达的抗原尤为关键。

举例：同时检测CD45RA和其他标志物时，若特别关注CD45RA表达情况，此时FMO对照指不加CD45RA流式抗体而其他流式抗体正常添加的对照，从而更显著地体现CD45RA表达情况，提高数据可靠性和准确性。

Section 04 — 同型（Isotype）对照

同型对照是一种特殊的阴性对照，是指使用与实验抗体同种属来源、同亚型、同荧光标记，但又与样本无特异性结合的抗体进行染色。这是为了排除样本和流式抗体间非特异性结合（包括死细胞/碎片吸附、疏水/静电结合、Fc受体结合等）而设置的，可以有效排除实验过程中因非特异性结合导致的假阳性结果。

Section 05 — 生物学对照

这个实际上就是WB、ELISA等实验中常见的对照组，例如已知阳性、已知阴性的样本，与以上其他对照组相比，这类对照是其他样本，而非实验中本身需要检测的样本，其对照作用体现在确定实验过程正常、处理和未处理样本区别等。

总结

流式实验中，对照组的合理设置尤为重要，合理的对照组设置可以有效避免假阳性、假阴性影响，保证结果准确、可靠和可重复性。

产品介绍

尚恩生物流式抗体产品采用国内外高分文献同样克隆号的抗体为原料，进口荧光染料通过优化工艺高效标记，有效保障了流式抗体特异性、灵敏度、稳定性、荧光强度等基础参数，实验结果可重复性、认可度都同时得到保障，实际使用效果不差于进口品牌的同类产品。同时，尚恩生物提供的不仅仅是流式抗体产品，相应的专业配色、实验操作、数据分析等全流程指导服务同步在线，有效保证实验的顺利进行。

同型对照抗体产品列表

货号	产品名称	宿主	标记物
SNFA-402	FITC Rat IgG2a,κ Isotype Control(2A3)	Rat	FITC
SNFA-562	PE Rat IgG2a,κ Isotype Control(2A3)	Rat	PE
SNFA-129	APC Rat IgG2a,κ Isotype Control(2A3)	Rat	APC
SNFA-401	FITC Rat IgG1,κ Isotype Control(HRPN)	Rat	FITC
SNFA-561	PE Rat IgG1,κ Isotype Control(HRPN)	Rat	PE
SNFA-128	APC Rat IgG1,κ Isotype Control(HRPN)	Rat	APC
SNFA-400	FITC Mouse lgG1,κ Isotype Control(MOPC-21)	Mouse	FITC
SNFA-560	PE Mouse lgG1,κ Isotype Control(MOPC-21)	Mouse	PE
SNFA-127	APC Mouse lgG1,κ Isotype Control(MOPC-21)	Mouse	APC
SNFA-685	PerCP Mouse IgG1,κ Isotype Control(MOPC-21)	Mouse	PerCP
SNFA-399	FITC Mouse IgG2a,κ Isotype Control(C1.18.4)	Mouse	FITC
SNFA-559	PE Mouse IgG2a,κ Isotype Control(C1.18.4)	Mouse	PE
SNFA-126	APC Mouse lgG2a,κ Isotype Control(C1.18.4)	Mouse	APC
SNFA-398	FITC Mouse lgG2b,κ Isotype Control(MPC-11)	Mouse	FITC
SNFA-558	PE Mouse IgG2b,κ Isotype Control(MPC-11)	Mouse	PE
SNFA-125	APC Mouse IgG2b,κ Isotype Control(MPC-11)	Mouse	APC