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- LABLEAD
- 北京
- RNA-25-500
- 2026年08月11日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
4℃或-20℃
- 供应商：
LABLEAD
- 规格：
25T
储存条件：可在4℃保存1年(确保完全密封)，或在-80℃长期保存，避免反复冻融。
产品描述
偶联anti-RFP纳米抗体的琼脂糖珠子用于免疫沉淀RFP融合蛋白。
产品优势
l没有普通抗体的轻链和重链，背景干净；
l即用型，节约时间；
l高亲和力，高载量；
应用范围
可用于免疫沉淀（IP）/免疫共沉淀（CoIP）、染色质免疫沉淀（ChIP）/RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP）、酶活性测定、质谱分析等。
特异性
特异性结合mCherry，RFP及 DsRed。
产品特性
存储缓冲液:(PBS含有20%乙醇)。
保存条件：可在4℃保存一年(确保完全密封),或在-80℃长期保存，避免反复冻融。
实验原理
实验步骤：
收集细胞
每个免疫沉淀反应大约使用 106-107 个表达RFP融合蛋白的细胞，可根据RFP融合蛋白表达量适当调整细胞数。
吸出培养基，向培养皿中加入预冷的1×PBS，漂洗2次，利用细胞刮或胰酶消化收集贴壁细胞，细胞转移到离心管，500g离心3分钟并丢弃上清液。
细胞裂解
1．在裂解缓冲液中加入蛋白酶抑制剂，用500μl预冷的裂解缓冲液重悬细胞。
2．置于冰上30分钟，可每10分钟充分吹打一次。
3．4℃，20,000g离心15分钟，将裂解产物（上清）转移到一个新的预冷管中，丢弃沉淀。
注意：此时细胞裂解产物可长期保存于-80℃。
平衡珠子
4．充分混匀RFP-Nanoab-Agarose，吸取20μl该产品到500μl预冷的裂解缓冲液中，4℃，2,500g离心30秒，丢弃上清液。（此步骤可选）
结合蛋白
5．将平衡好的RFP-Nanoab-Agarose加入到细胞裂解产物中（如果未做第4步，可在细胞裂解产物中直接加入20μl该产品），于4℃旋转混合结合1小时。根据实验需要可调整结合时间。如果需要，留存50μl的裂解产物进行免疫印迹分析。
6．4℃，2,500g离心30秒，丢弃上清液。如果需要，留存50μl上清液进行免疫印迹分析。
清洗珠子
7．用500μl预冷的裂解缓冲液中重悬6中的RFP-Nanoab-Agarose，4℃，2,500g条件下离心30秒，丢弃上清液并重复清洗3次。尽量减少清洗时间。
洗脱蛋白
方法一：
8．加入20μl 2×SDS-sample buffer重悬RFP-Nanoab-Agarose。95℃，加热10min充分变性，2,500g离心30秒收集上清，收集的产物可进行SDS-PAGE及免疫印迹分析。
方法二：
9．加入50μl 0.2 M pH2.5的甘氨酸洗脱结合的蛋白，孵育时间30秒，期间不断混匀，2,500g离心30秒收集上清，立即加入5μl 1.0 M Tris（pH10.4）以中和酸性的甘氨酸。
注意：为了提高洗脱效率可以重复这一步。
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