怎样选择一种缓冲液(Buffer)?
如果你已经知道哪种缓冲液用在微波的某种组织抗原修复,那么用抗原修复锅时,这种缓冲液也同时适用的机会很大。我们提供四种即用型缓冲液R-Buffer A/B/C/U,同时也提供同种更加温和的组织处理缓冲液,我们称之为G系列,R-Buffer AG/BG/CG/UG。
选择Buffer,主要考虑以下两点:
1. 抗原的自然特性以及所选择的抗体
抗原自身特性和抗原的位置都是首要考虑。我们建议你刚开始的时候选择抗原表达环境的最适Buffer。以下是经验供大家参考:
Most of the nuclear antigens (apoptosis-related, survival-related, proliferation-related) R: Buffer A (or AG).
Cell adhesion molecules, cell membrane antigens (extracellular domain) R: Buffer A (or AG)
Cytoskeleton and cytoskeleton-associated molecules – R:Buffer A (or AG)
Intracellular domain of some adhesion molecules and surface receptors – R:Buffer B (or BG)
Intracellular domain of some adhesion molecules and surface receptors – R:Buffer C (or CG)
Most of antibodies raised against a linear peptide – R: Buffer U (or UG)
2. 固定液以及固定程度
建议的组织切片的抗原修复处理是一种针对普通的适化状态切片。如果用来切片的组织块没有充分固定,或者过固定(留在福尔马林溶液中时间过长),或者用了其它的固定液,那么,处理组织切片的流程方案需要重新修订,最便利的办法是选择使用G系列缓冲液。对于过固定的材料一般推荐用U buffer,或者在同一Buffer里面增加循环。
使用抗原修复锅进行染色的效果示例
1.福尔马林固定,石蜡包埋,人乙状结肠组织切片,经抗原修复锅进行抗原暴露,R-Buffer C (pH 6.0),组织玻片降温过夜,抗体MIB-1,抗原Ki-67,R-Detect HRP系统染色。
2.福尔马林固定,石蜡包埋,人乙状结肠组织切片,经抗原修复锅进行抗原暴露,R-Buffer A (pH 8.1),组织玻片降温过夜,抗体#4B11,抗原CD8 (cell membrane),R-Detect HRP系统染色。