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血液基因组DNA提取试剂盒

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血液基因组DNA提取试剂盒

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  • 货号: N1121
    供应商: 东盛生物
    数量: 大量
    规格: 50次

    产品组分

     

     

    组分

    货号

    N1121

    N1122

    红细胞裂解液RS

    80 ml

    80 ml×2

    消化缓冲液DS

    15 ml

    30 ml

    裂解液MS

    20 ml

    40 ml

    蛋白酶K

    1 ml

    2 ml

    去蛋白液PS

    30 ml

    60 ml

    漂洗液PE

    15 ml

    30 ml

    纯化液TE

    5 ml

    10 ml

    DNA纯化柱

     50个

     100个

    说明书

    1份

    1份

    注: 裂解液MS中含有变性剂,请不要直接接触皮肤。

             漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

     

    保存条件

    蛋白酶K于-20℃保存。

    其余试剂置于室温(15-25℃)干燥条件下保存1年。

    如消化缓冲也DS有沉淀,在55℃加热溶解,待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。

     

    产品说明

    本产品可用于全血样本的基因组DNA的纯化。纯化原理是首先利用红细胞裂解液先去除血液中的红细胞*,细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA,由硅胶膜柱

    可逆吸附体系内的基因组DNA,经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质等杂质后,用纯化液洗脱获得基因组DNA。

    本产品适用于未凝固全血,以及经各种抗凝剂(EDTA、肝素、柠檬酸)处理过的全血样本。一次可从0.4 ml全血中提取到3-10 μg高纯度基因组DNA

    (OD260/OD280 =1.7-1.9),此基因组DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验。

    *本产品不能从全血中直接提取DNA,要去除血液中红细胞后才能得到高浓度的基因组DNA。如要直接从全血迅速提取高纯度基因组DNA,建议选择Quick血液基因组DNA提取试

    剂盒(东盛)。

     

    产品特点

    高效:一次可获得3-10 μg基因组DNA。

    高纯度:无须再纯化即可直接用于下游实验。

    安全: 整个操作中不用酚/氯仿有机物。

    产品用途

    常规限制性酶切

    PCR扩增

    文库构建

    Southern 杂交

    分子标记分析

     

    质量控制

    纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷基因的PCR扩增鉴定。

     

    血液基因组DNA提取流程图

    图1  血液基因组DNA纯化流程图

     

    操作方法

    1  取血液样本,每400 μl血液加入到一只1.5ml离心管中。加入2倍体积的红细胞裂解液RS。漩涡振荡或上下来回颠倒混匀。5,000 rpm离心3min,弃上清,收集

    白色或淡红色沉淀。

     注:如沉淀仍然呈深红色,表明红细胞裂解不充分,可再加500 μl红细胞裂解液RS处理一次。

             对于哺乳动物全血,每400 μ全血中可提取3-10 μg的基因组DNA。如从鸟类、两栖类或更低级的动物血液中提取基因组DNA,因其血液中红细胞有细胞核,血液用量勿超过

            20 μl/离心管。每20 μl全血中可提取40 μg的基因组DNA。

    2  加入200 μl消化缓冲液DS,旋涡振荡直至完全分散。

        注:如需去除RNA,加入消化缓冲液DS后,再加入4μl RNase A(100 mg/ml)溶液,震荡混匀,室温放置5min。

    3  加入20 μl蛋白酶K和220 μl裂解液MS,漩涡振荡混匀。65℃温浴10min。溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠。

    注:加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀,一般65℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 不

    纯。

    4  加入220 μl无水乙醇,上下来回颠倒混匀。此时可能出现絮状沉淀,将溶液及絮状沉全部淀转移到纯化柱中。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

        注:此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

    5  加入500 μl去蛋白液PS。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

       注:此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质洗脱,以获得高质量基因组DNA。

    6  加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

       注:漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释,即含75%乙醇。

    7  加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min,弃滤液。

    8  12,000 rpm离心3min,以彻底去除纯化柱中残留的液体。

       注:此步骤的作用是去除残留乙醇,避免影响后续的酶促反应(PCR或酶切)。同时利于基因组DNA充分溶解。

    9     将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处,悬空滴加30-100 μl洗脱液TE。室温放置2min。

    10  12,000 rpm离心2min,管底即为高纯度基因组DNA。-20℃保存。

       注:洗脱液TE可用去离子水代替,但其pH需为8.0-8.5。体积视质粒拷贝数多少、用户对质粒浓度要求而定。

               对洗脱液TE 进行60℃预热,会提高基因组DNA的产量。

     

    图2  基因组DNA电泳图

     

     

    注意事项

    1  柠檬酸、EDTA和肝素三种抗凝剂均可使用。但肝素对酶促反应有可能起抑制作用。采血时如没有特殊要求,请使用柠檬酸或EDTA处理血样。

    2  基因组DNA的得率,会因抗凝剂的种类以及血液保存条件的不同而各异。

    3  基因组DNA需长期保存时,建议使用纯化液TE。用无菌的离心管分装后保存于-20℃或-80℃。

     

    基因组DNA的浓度及纯度检测

    1  基因组DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯

    度。

    2  DNA 应在OD260 处有显著吸收峰, OD260 值为1 相当于大约50 μg/ml 双链

    DNA、40 μg/ml 单链DNA。

    3  OD260/OD280 比值应为1.7–1.9,如果洗脱时不使用纯化液TE,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

     


     

    温馨提示:不可用于临床治疗。

    资料下载:

    (N1121-N1122)血液基因组DNA提取试剂盒.pdf 附件下载 (下载 14 次)

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